發(fā)布時(shí)間：2017-09-26 00:31

  本文關(guān)鍵詞：中東呼吸綜合征冠狀病毒實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立

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【摘要】：目的建立一種快速、敏感、特異的實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)方法,用于中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)的檢測(cè)。方法根據(jù)中東呼吸綜合征冠狀病毒S蛋白基因的保守序列設(shè)計(jì)并合成一對(duì)引物及一條特異性TaqMan探針。通過(guò)條件優(yōu)化,以10倍系列稀釋重組質(zhì)粒為標(biāo)準(zhǔn)品,進(jìn)行Real-time PCR擴(kuò)增,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并進(jìn)行重復(fù)性、準(zhǔn)確性、特異性及敏感性檢測(cè)。結(jié)果建立的Real-time PCR方法檢測(cè)中東呼吸綜合征冠狀病毒所繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的相關(guān)系數(shù)0.99,靈敏度為1.00×101拷貝,高于常規(guī)PCR方法(1.00×102拷貝);用該方法檢測(cè)中東呼吸綜合征冠狀病毒基因?yàn)殛?yáng)性,其他6種對(duì)照呼吸道病原體及冠狀病毒基因檢測(cè)均呈陰性;批內(nèi)、批間重復(fù)試驗(yàn)的變異系數(shù)均1%。結(jié)論建立的中東呼吸綜合征冠狀病毒Real-time PCR檢測(cè)方法靈敏、特異、重復(fù)性好,可用于中東呼吸綜合征冠狀病毒感染的快速診斷和流行病學(xué)調(diào)查。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所;吉林省人獸共患病預(yù)防與控制重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 中東呼吸綜合征冠狀病毒 實(shí)時(shí)熒光定量PCR TaqMan探針 檢測(cè)方法
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013BAD12B04) 中國(guó)博士后科學(xué)基金項(xiàng)目(No.2013M541089)
【分類號(hào)】：R373.1
【正文快照】： 中東呼吸綜合征(Middle East respiratory syn-drome,MERS)是由中東呼吸綜合征冠狀病毒(MiddleEast respiratory syndrome coronavirus,MERS-CoV)引起的一種高致病性、急性下呼吸道傳染病。與SARS冠狀病毒感染相似,人感染MERS-CoV后會(huì)出現(xiàn)急性、嚴(yán)重呼吸道疾病,伴有發(fā)熱、咳嗽

【相似文獻(xiàn)】

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：920490