發(fā)布時間：2017-09-24 16:08

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的H7N9禽流感病毒血凝素基因快速真核表達系統(tǒng)的建立

  更多相關(guān)文章： HN禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒載體 真核表達系統(tǒng)

【摘要】：目的利用慢病毒載體構(gòu)建新型H7N9禽流感病毒血凝素(HA)基因的快速真核表達體系,在人胚腎細胞(HEK293T)中表達并進行功能鑒定。方法提取H7N9禽流感病毒基因組RNA,采用反轉(zhuǎn)錄PCR技術(shù)擴增HA讀碼框全長基因,將HA基因連接pMD18-T載體構(gòu)建pMD18-T-HA重組載體。設(shè)計含Kozak序列的引物從pMD18-T-HA質(zhì)粒中擴增出平末端HA基因,采用Topo克隆構(gòu)建表達載體pLenti-HA-V5。將表達載體轉(zhuǎn)染HEK293T細胞,通過間接免疫熒光法(IFA)和Western blot法鑒定HA蛋白的表達,通過血凝實驗鑒定重組蛋白的生物學(xué)活性。結(jié)果經(jīng)反轉(zhuǎn)錄PCR獲得1 683 bp的HA全長基因,完成真核表達載體的構(gòu)建并表達出相對分子質(zhì)量(Mr)為70 000的重組蛋白。IFA和Western blot法結(jié)果顯示該蛋白與陽性血清具有良好的免疫反應(yīng),同時血凝實驗證實其具有血凝活性。結(jié)論成功利用慢病毒載體建立了HA蛋白的快速真核表達系統(tǒng),為研制H7N9病毒亞單位疫苗、中和表位研究、假病毒包裝奠定基礎(chǔ)。
【作者單位】： 江蘇省疾病預(yù)防控制中心衛(wèi)生部腸道病原微生物重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： HN禽流感病毒 血凝素基因 慢病毒載體 真核表達系統(tǒng)
【基金】：國家科技重大專項(2012ZX10004-210-004)
【分類號】：R373.13
【正文快照】： 2013年4月初在中國地區(qū)首次分離到人感染H7N9禽流感病毒[1],據(jù)國家衛(wèi)生計生委統(tǒng)計,截止2013年5月31日全國共報道確診病例131人,死亡病例39人,病死率高達29.8%,給公共衛(wèi)生帶來極大的安全隱患[2]。由于流感病毒容易變異,早期發(fā)病的診斷顯得尤為重要。目前,檢測流感病毒的技術(shù)主

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本文編號：912330