發(fā)布時(shí)間：2017-09-23 19:10

  本文關(guān)鍵詞：RBM5基因表達(dá)載體構(gòu)建、穩(wěn)定轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞系的建立及功能的初步研究

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【摘要】：目的:通過(guò)構(gòu)建表達(dá)載體、建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染RNA結(jié)合基序5(RNA binding motif 5,RBM5)的A549細(xì)胞系,初步研究RBM5基因過(guò)表達(dá)對(duì)A549細(xì)胞增殖以及天冬-谷-丙-組氨酸盒多肽15[DEAH box polypeptide 15,DHX15]表達(dá)的影響。方法:應(yīng)用分段克隆法構(gòu)建pc DNA3.1(+)/RBM5真核表達(dá)載體;將測(cè)序驗(yàn)證后的重組質(zhì)粒pc DNA3.1(+)/RBM5轉(zhuǎn)染肺腺癌A549細(xì)胞并以G418進(jìn)行篩選,采用Western印跡鑒定RBM5基因過(guò)表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞,流式細(xì)胞儀分別檢測(cè)經(jīng)pc DNA3.1(+)/RBM5穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞[pc DNA3.1(+)/RBM5-A549]及pc DNA3.1(+)空白質(zhì)粒轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞[pc DNA3.1(+)-A549]的周期分布;運(yùn)用RT-PCR技術(shù)分別檢測(cè)pc DNA3.1(+)/RBM5-A549和pc DNA3.1(+)-A549細(xì)胞中剪接相關(guān)因子DHX15的表達(dá)情況。結(jié)果:成功構(gòu)建出pc DNA3.1(+)/RBM5真核表達(dá)載體,篩選出RBM5基因穩(wěn)定轉(zhuǎn)染過(guò)表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞株;pc DNA3.1(+)/RBM5-A549較pc DNA3.1(+)-A549細(xì)胞處于G1期細(xì)胞比例增大、S期細(xì)胞比例減小(均P0.01);c DNA3.1(+)/RBM5-A549較pc DNA3.1(+)-A549細(xì)胞的DHX15表達(dá)上調(diào)(P0.01)。結(jié)論:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pc DNA3.1(+)/RBM5,并建立了RBM5穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的A549細(xì)胞系;初步證實(shí)RBM5基因過(guò)表達(dá)可抑制肺腺癌A549細(xì)胞的細(xì)胞周期,并使DHX15表達(dá)上調(diào)。
【作者單位】： 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院老年病科;中南大學(xué)湘雅三醫(yī)院醫(yī)學(xué)科研中心;
【關(guān)鍵詞】： RNA結(jié)合基序 A細(xì)胞系 天冬-谷-丙-組氨酸盒多肽 基因克隆 質(zhì)粒構(gòu)建 腫瘤抑制 細(xì)胞周期
【基金】：湖南省科技計(jì)劃項(xiàng)目(06SK3029-7)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R363
【正文快照】： Construction of RBM5 vector,establishment of stablytransfected A549 cell line and preliminary researchon the function of RBM5 geneXIAO Jian1,LI Nian1,XING Xiaowei2,HE Bixiu1(1.Department of Geriatrics,Xiangya Hospital,Central South University,Changsha 41

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本文編號(hào)：906971