本文關(guān)鍵詞：羅漢果GAPDH基因的克隆及其在基因表達(dá)分析中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 羅漢果 甘油酸--磷酸脫氫酶 內(nèi)參基因 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

【摘要】：目的克隆羅漢果甘油酸-3-磷酸脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH,EC 1.2.1.12)基因,分析其在基因表達(dá)定量研究中其作為內(nèi)部參照基因的可行性。方法采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技術(shù),以羅漢果cDNA為模板擴(kuò)增GAPDH基因的保守區(qū)片段。結(jié)果獲得了羅漢果GAPDH保守區(qū)序列cDNA,命名為SgGAPDH(GenBank注冊(cè)號(hào):KC410810),序列長(zhǎng)度為627 bp,編碼209個(gè)氨基酸的多肽。系統(tǒng)發(fā)育分析表明,SgGAPDH屬于植物甘油酸-3-磷酸脫氫酶家族。半定量PCR分析表明羅漢果GAPDH基因在不同組織中表達(dá)很穩(wěn)定。以其作為內(nèi)部參照基因,采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real-time PCR)研究了異戊烯基焦磷酸異構(gòu)酶(Isopentenyl-diphosphate delta isomerase)的組織表達(dá)規(guī)律。結(jié)果顯示SgGAPDH具有良好的擴(kuò)增效果和重現(xiàn)性。結(jié)論首次克隆了羅漢果GAPDH基因,明確了該序列在基因表達(dá)分析中的內(nèi)參照作用,為羅漢果甜苷生物合成基因的研究提供了條件。
【作者單位】： 桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院;桂林亦元生現(xiàn)代生物技術(shù)有限公司;蘭州城市學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 羅漢果 甘油酸--磷酸脫氫酶 內(nèi)參基因 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81260619) 廣西教育廳高�？蒲许�(xiàng)目(No.201204LX256) 國(guó)家級(jí)大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.201210601005) 廣西高校大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃項(xiàng)目(No.599) 桂林醫(yī)學(xué)院“項(xiàng)目驅(qū)動(dòng)教學(xué)”專項(xiàng)課題(No.10)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 基因表達(dá)定量研究是了解植物代謝機(jī)制和分子功能的重要手段和基礎(chǔ)。相比傳統(tǒng)的Northern雜交(Northern blotting)、半定量RT-PCR、基因芯片(microarray)等方法,實(shí)時(shí)定量PCR(real-time PCR)準(zhǔn)確、快速、可靠、靈敏度高,因而得到了廣泛的應(yīng)用。然而,由于受初始模板量、RNA完整性

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 朱華;李s，

本文編號(hào)：894879