本文關(guān)鍵詞：大鼠毛囊干細(xì)胞的體外培養(yǎng)及相關(guān)檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)研究

  更多相關(guān)文章： 毛囊干細(xì)胞 Q-PCR 免疫細(xì)胞化學(xué) 創(chuàng)傷修復(fù)與再生

【摘要】：目的:建立體外分離培養(yǎng)、擴(kuò)增、鑒定大鼠毛囊干細(xì)胞(rat hair follicle stem cells,rHFSCs)的方法,觀察其生物學(xué)特性。方法:切取1周齡SD大鼠觸須部皮膚,用Dispase酶和IV型膠原酶混合液消化,顯微鏡下分離毛囊隆突部,用組織塊法培養(yǎng)rHFSCs,培養(yǎng)基為DMEM/F12基礎(chǔ)培養(yǎng)基,加不同濃度的KSR血清替代物、青鏈霉素混合液、L-谷氨酰胺、非必需氨基酸、EGF、bFGF、羥基乙醇和氫化可的松。用IV型膠原差速貼壁法純化rHFSCs,再通過(guò)細(xì)胞免疫熒光染色及Q-PCR檢測(cè)相關(guān)基因來(lái)聯(lián)合鑒定,分別取不同代rHFSCs檢測(cè)細(xì)胞增殖能力和活力。結(jié)果:以上方法分離、培養(yǎng)、純化的HFSCs呈典型的鋪路石狀,貼壁較牢,克隆形成能力強(qiáng)。免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定可見(jiàn)角蛋白15(Keratin-15,Krt15)、整合素α6(Integrin-α6,Itgα6)和整合素β1(Integrin-β1,Itgβ1)抗體表達(dá)呈陽(yáng)性。純化后的細(xì)胞最初2~3d細(xì)胞處于生長(zhǎng)的潛伏期,5~6d時(shí)細(xì)胞處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期;從第7代開始,隨著傳代次數(shù)的增加,細(xì)胞活力也明顯下降。Q-PCR檢測(cè)發(fā)現(xiàn),經(jīng)過(guò)全新的培養(yǎng)體系得到的干細(xì)胞活性大,擁有較強(qiáng)的增殖能力,幾乎不含有表皮角質(zhì)形成細(xì)胞。結(jié)論:改進(jìn)的顯微鏡聯(lián)合組織塊法分離培養(yǎng)rHFSCs,經(jīng)IV型膠原差速貼壁法篩選后,可得到高純度的rHFSCs,細(xì)胞增殖能力強(qiáng),可以為干細(xì)胞組織工程學(xué)構(gòu)建人工毛囊、血管及皮膚等提供良好的種子細(xì)胞。
【作者單位】： 浙江省蕭山中醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 毛囊干細(xì)胞 Q-PCR 免疫細(xì)胞化學(xué) 創(chuàng)傷修復(fù)與再生
【基金】：浙江省公益技術(shù)應(yīng)用研究社會(huì)發(fā)展項(xiàng)目(No.2010C330133)
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 干細(xì)胞是一種具有未分化性、自我更新快和體外增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)的未分化細(xì)胞,而毛囊干細(xì)胞(Hair follicle stem cells,HFSCs)被普遍認(rèn)為主要存在于毛囊外根鞘(Outer root sheath,ORS)的隆突部(bulge)[1~2]。研究表明體外培養(yǎng)的HFSCs表現(xiàn)出了高克隆形成能力,且具有非常高的再生

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 奉水東;譚紅專;凌宏艷;袁秀琴;;實(shí)時(shí)定量PCR 2~(-△△Ct)法檢測(cè)非小細(xì)胞肺癌HER2基因的過(guò)表達(dá)[J];中國(guó)肺癌雜志;2011年12期

2 王聯(lián)群;藍(lán)蔚;黃培信;林尊文;劉德伍;;Ⅳ型膠原快速黏附法體外分選人胎兒表皮干細(xì)胞[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2008年43期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁冠標(biāo);陳銘伍;冼磊;梁祥森;;轉(zhuǎn)移抑制基因NM23-H1在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義[J];廣西醫(yī)學(xué);2012年06期

2 崔凱;任立坤;;β-catenin對(duì)絨山羊毛囊發(fā)育的影響[J];中國(guó)草食動(dòng)物科學(xué);2012年S1期

3 王宏;高峰;劉迎春;周歡敏;;絨山羊毛囊干細(xì)胞的分離培養(yǎng)及誘導(dǎo)分化鑒定[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年10期

4 王卓;李光玉;楊雅涵;張鐵濤;張海華;孫皓然;孫偉麗;;β-catenin和BMP2基因在幼齡水貂皮膚中表達(dá)的研究[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2014年11期

5 郭海珍;;nm23-H1蛋白在食管癌組織中的表達(dá)及意義[J];海南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年03期

6 張志強(qiáng);王玉杰;李佳;木拉提·熱夏提;;大鼠毛囊干細(xì)胞的成骨及成脂誘導(dǎo)[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年04期

7 牛紅梅;彭光耀;;重組hEGF治療糖尿病合并白內(nèi)障超聲乳化術(shù)后干眼癥臨床療效[J];昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2014年03期

8 王瀟;尹俊;;內(nèi)蒙古白絨山羊毛囊干細(xì)胞巢的間接定位[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報(bào);2014年03期

9 劉儀紅;王普杰;田浩明;周毅;鄧勇;;自體骨髓干細(xì)胞移植治療足毀損傷伴重度皮膚缺損的臨床研究[J];瀘州醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2014年02期

10 李兆順;尚培中;;轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子八聚體4與消化系統(tǒng)腫瘤的研究進(jìn)展[J];解放軍醫(yī)藥雜志;2014年12期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 谷聰敏;胎鼠真皮細(xì)胞誘導(dǎo)毛發(fā)形成的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

2 張志丹;Wnt10b調(diào)控人毛囊生長(zhǎng)的分子機(jī)制實(shí)驗(yàn)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2013年

3 文坤明;Oct4在富集腫瘤干細(xì)胞的結(jié)直腸耐藥細(xì)胞株中抗凋亡作用及機(jī)制研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2013年

4 崔志峰;山羊毛囊細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定及毛囊體外重塑研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

5 王瑤;毛囊干細(xì)胞的多分化潛能及其向汗腺細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];南開大學(xué);2013年

6 倪宇昕;MicroRNA對(duì)人毛囊神經(jīng)嵴干細(xì)胞向Schwann細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2014年

7 楊茜;多巴結(jié)構(gòu)用于材料表面的仿生修飾及其生物學(xué)基礎(chǔ)研究[D];吉林大學(xué);2014年

8 高云鶴;以脫細(xì)胞臍動(dòng)脈為支架構(gòu)建組織工程血管的研究[D];吉林大學(xué);2014年

9 白春雨;基于Oct-4、Sox2、Kif4和c-Myc基因克隆的東北虎體細(xì)胞重編程研究[D];東北林業(yè)大學(xué);2014年

10 徐靜;皮膚源性前體細(xì)胞體外分化與細(xì)胞體內(nèi)移植延緩失神經(jīng)肌肉萎縮的實(shí)驗(yàn)研究[D];復(fù)旦大學(xué);2013年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 梁冠標(biāo);HPA和NM-23在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及其相關(guān)性研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2012年

2 肖京;復(fù)方中藥軟膏在豬斷層皮創(chuàng)面愈合中作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];鄭州大學(xué);2013年

3 張艷玲;E-cadherin、β-catenin及Oct-4、Sox-2表達(dá)與胃癌術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移的關(guān)系[D];鄭州大學(xué);2013年

4 左彬;SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（BMSCs）體外培養(yǎng)方法改良[D];鄭州大學(xué);2013年

5 惠學(xué)玲;人羊膜治療家兔皮膚Ⅲ度燒傷的作用與抗炎機(jī)制研究[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

6 黃昕昕;大鼠不同部位來(lái)源脂肪源性干細(xì)胞的增殖能力比較及CM-Dil體外標(biāo)記研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2012年

7 符雪;不同冷凍保護(hù)劑對(duì)冷凍保存大鼠皮膚活性的影響[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

8 劉衡;Oct4蛋白在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)及臨床意義的研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2012年

9 管樂(lè);人毛囊體外保存的實(shí)驗(yàn)研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

10 肖靜;ACEI對(duì)創(chuàng)面愈合過(guò)程中表皮干細(xì)胞增殖、遷移影響的研究[D];暨南大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

1 孫曉慶,付小兵,盛志勇;表皮干細(xì)胞[J];中華創(chuàng)傷雜志;2000年10期

2 張翠萍;付小兵;李淑云;孫同柱;孫曉艷;蔡颯;;高鈣培養(yǎng)促進(jìn)人表皮角質(zhì)細(xì)胞間的黏附和聚集[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2007年08期

3 吳曙華,蔣紹慶,段光軍,胡筠珠,胡華成;HER2、HER1在非小細(xì)胞肺癌中過(guò)度表達(dá)及其臨床意義[J];腫瘤;2005年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 連小華;;毛囊干細(xì)胞研究新進(jìn)展[J];局解手術(shù)學(xué)雜志;2010年03期

2 弓慧敏;李方華;萬(wàn)婷;羅英霞;龐全海;;毛囊干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2010年07期

3 ;中國(guó)毛囊干細(xì)胞研究領(lǐng)域——著名專家介紹[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2011年49期

4 仇文穎,許增祿,錢曉菁,徐園園,李莉;毛囊干細(xì)胞的體外研究[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2002年01期

5 仇文穎,許增祿;毛囊干細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2002年04期

6 仇文穎;許增祿;徐園園;;成人毛囊干細(xì)胞分選及β-連環(huán)蛋白表達(dá)的研究[J];解剖學(xué)報(bào);2006年02期

7 華云旗;李秀蘭;張楊;;微環(huán)境調(diào)控毛囊干細(xì)胞增殖與分化的研究進(jìn)展(綜述)[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2006年S1期

8 耿松梅;王劍利;王萬(wàn)卷;譚升順;彭振輝;;毛囊干細(xì)胞定位和體外向表皮分化[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2006年03期

9 朱培成;yす，

本文編號(hào)：894442