本文關(guān)鍵詞：基于DNA折紙的DNA復(fù)制的單分子檢測(cè)和表征

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【摘要】：目的探索DNA復(fù)制的單分子檢測(cè)和表征途徑。方法單鏈DNA模板鏈的兩端通過堿基互補(bǔ)配對(duì)固定在DNA折紙納米結(jié)構(gòu)上,利用原子力顯微鏡(AFM)在單個(gè)DNA分子水平上對(duì)復(fù)制過程中的DNA分子的不同階段進(jìn)行檢測(cè)和表征,其中包括:復(fù)制前后的形貌,復(fù)制過程中大腸桿菌DNA聚合酶ⅠKlenow Fragment片段(KF)的分布,以及復(fù)制后Biotin-Streptavidin(BA)分子識(shí)別反應(yīng)在單個(gè)DNA鏈上所引起的進(jìn)一步形貌變化。同時(shí),采用常規(guī)的瓊脂糖凝膠電泳方法分析DNA復(fù)制前后的變化情況。結(jié)果(1)DNA模板鏈成功連結(jié)在三角折紙的特定位點(diǎn),連接效率達(dá)到50%以上;(2)DNA復(fù)制過程中,KF結(jié)合在DNA模板鏈上,復(fù)制后KF從DNA鏈脫離;(3)復(fù)制前后DNA鏈高度變化明顯,DNA鏈高度增加了約0.7 nm;(4)復(fù)制后,當(dāng)加入Streptavidin時(shí),其結(jié)合于含有Biotin標(biāo)記的新合成DNA鏈位置處,形成BA復(fù)合物,平均高度達(dá)到約4.9 nm;(5)瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果也顯示單鏈DNA變?yōu)殡p鏈,以及雙鏈DNA分子上結(jié)合的BA復(fù)合物。結(jié)論通過將AFM與DNA折紙技術(shù)相結(jié)合,可實(shí)現(xiàn)單分子水平上的DNA復(fù)制的檢測(cè)和表征,此方法將有助于研究DNA聚合酶的作用機(jī)制以及不同因素對(duì)DNA復(fù)制的影響。
【作者單位】： 中國(guó)科學(xué)院上海應(yīng)用物理研究所物理生物研究室;寧波大學(xué)物理系;
【關(guān)鍵詞】： 原子力顯微鏡 DNA折紙 DNA復(fù)制 單分子
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(11375253,11074137,21073222) 國(guó)家科技部973項(xiàng)目(2012CB932600,2013CB932800) 中國(guó)科學(xué)院知識(shí)創(chuàng)新工程項(xiàng)目(KJCX2-EW-N03)~~
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： DNA復(fù)制不但是生命體內(nèi)最基本的過程,而且在基礎(chǔ)研究、臨床診斷和法醫(yī)上都有重要應(yīng)用[1-2]。DNA復(fù)制時(shí),其雙鏈打開,形成復(fù)制叉,從打開的起點(diǎn)向兩個(gè)方向形成的兩條DNA單鏈分別做為模板,按照5'-3'的方向各自合成一條新的DNA鏈[3-4]。整個(gè)過程除了DNA模板,還需要RNA引物,dNTPs底

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 江明宏;舒茂琴;覃躍龍;;ORC1與大鼠血管平滑肌細(xì)胞DNA復(fù)制的關(guān)系及意義探討[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2006年06期

2 趙雪云;細(xì)胞器DNA:瘧原蟲DNA復(fù)制中的小角色[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).寄生蟲病分冊(cè);1997年03期

3 劉德忠;乳頭瘤病毒E1蛋白研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).流行病學(xué).傳染病學(xué)分冊(cè);2000年03期

4 曾越;EB病毒裂解期DNA復(fù)制的研究概況[J];華夏醫(yī)學(xué);2000年01期

5 王芙蓉;袁慧;肖文伍;張?zhí)K明;趙浩斌;鄭新民;魏慶信;;人bcl-xl轉(zhuǎn)基因小鼠外源基因的復(fù)制及其傳代穩(wěn)定性(英文)[J];中國(guó)臨床康復(fù);2006年30期

6 張曉偉,童坦君;真核生物DNA復(fù)制與細(xì)胞周期的關(guān)系[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).分子生物學(xué)分冊(cè);1995年06期

7 王吉偉;活化的人P53蛋白對(duì)核DNA復(fù)制的一種直接效應(yīng)[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).分子生物學(xué)分冊(cè);1996年01期

8 周宜;居間纖維[J];化學(xué)教學(xué);1993年01期

9 張鵬;沈筱筠;周春仙;楊軍;;NBS1功能研究進(jìn)展[J];中國(guó)藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2008年06期

10 宋楠萌;桑建利;徐恒;;增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)的分子結(jié)構(gòu)及其生物學(xué)功能研究進(jìn)展[J];自然科學(xué)進(jìn)展;2006年10期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 鞠桂芝;付士波;閆鳳琴;李鵬武;;電離輻射及MMC誘導(dǎo)細(xì)胞周期解偶聯(lián)的實(shí)驗(yàn)研究[A];全國(guó)醫(yī)用輻射防護(hù)與安全學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2004年

2 王水良;楊樺;謝幼華;汪垣;王龍;王鑄鋼;傅繼梁;;人核受體hB1F(NR5A2)轉(zhuǎn)基因小鼠的建立[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)醫(yī)學(xué)細(xì)胞生物學(xué)、免疫細(xì)胞生物學(xué)和發(fā)育生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2002年

3 黃功華;劉新光;梁念慈;;蛋白激酶CK2的反義核酸及其應(yīng)用[A];第八屆全國(guó)生化藥理學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第七屆Servier獎(jiǎng)?lì)C獎(jiǎng)大會(huì)會(huì)議摘要集[C];2003年

4 胡大海;朱雄翔;董茂龍;徐明達(dá);陳璧;崔大祥;;反義PCNA和bcl-2脫氧寡核苷酸抑制瘢痕成纖維細(xì)胞增殖的作用[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第六屆全國(guó)燒傷外科學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2001年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 基因潮;FoxM1B基因 人體康復(fù)動(dòng)力[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

2 田學(xué)科;特殊酶拯救DNA修復(fù)[N];科技日?qǐng)?bào);2004年

3 阿牛;“分子鐘”與人體衰老和腫瘤[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2000年

4 香港麥迪信醫(yī)學(xué)出版有限公司供稿;DnaE2蛋白：結(jié)核桿菌耐藥的罪魁禍?zhǔn)譡N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前6條

1 劉定燮;SV40載體/COS7細(xì)胞穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)的建立與改進(jìn)[D];中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2002年

2 Isaac Dadzie;[D];江蘇大學(xué);2013年

3 石斌山;FEN-1基因功能及其在遺傳不穩(wěn)定形成中的作用研究[D];浙江大學(xué);2001年

4 李園園;人增殖細(xì)胞核抗原基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];中國(guó)科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2003年

5 倪曉華;人類基因PanK、Rab2B、NM23-H1B和VRK3的克隆和功能研究[D];復(fù)旦大學(xué);2003年

6 王艷;正痘病毒檢測(cè)基因芯片的研制研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 劉德忠;抗HPV-6b/11 E1通用核酶—Rz1198和Rz1282的體外制備、活性鑒定及鳥槍型核酶pRE1的構(gòu)建[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2000年

2 李毅;低氧預(yù)刺激對(duì)大鼠骨髓源性內(nèi)皮祖細(xì)胞生物學(xué)活性的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

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本文編號(hào)：889192