本文關(guān)鍵詞：RNA干擾LOX-1表達(dá)對(duì)氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制

  更多相關(guān)文章： 血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體 RNA干擾 細(xì)胞間黏附分子 單核細(xì)胞趨化蛋白 一氧化氮 RhoA/Rho激酶

【摘要】：目的構(gòu)建血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體1(LOX-1)基因的RNA干擾慢病毒載體并轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞。觀察干擾LOX-1表達(dá)后對(duì)氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)機(jī)制。方法針對(duì)已經(jīng)篩選確定的小干擾RNA有效干擾序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干擾序列,測(cè)定滴度。轉(zhuǎn)染人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞96 h后,通過(guò)熒光顯微鏡觀察轉(zhuǎn)染效率,逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和Western blot檢測(cè)LOX-1的抑制效率。轉(zhuǎn)染72 h后加入150 mg/L ox-LDL處理24 h;噻唑藍(lán)比色法檢測(cè)細(xì)胞存活率;硝酸還原酶法檢測(cè)各組內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)液一氧化氮(NO)的含量;Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞間黏附分子1(ICAM-1)、單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表達(dá)。結(jié)果測(cè)序結(jié)果證實(shí),靶向人LOX-1的干擾慢病毒載體構(gòu)建成功,包裝后慢病毒滴度為6×1011TU/L。轉(zhuǎn)染組與未轉(zhuǎn)染組比較,LOX-1 mRNA與蛋白的表達(dá)明顯減少(P0.01)。與正常對(duì)照組相比,ox-LDL處理組能明顯減低內(nèi)皮細(xì)胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表達(dá)(P0.05);與ox-LDL處理組相比,干擾LOX-1表達(dá)后對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞存活率、NO生成量減低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表達(dá)增高均有明顯抑制作用(P0.05)。結(jié)論干擾LOX-1表達(dá),對(duì)ox-LDL誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞引起的ICAM-1、MCP-1高表達(dá)和RhoA/Rho激酶信號(hào)通路的激活及細(xì)胞存活率、NO生成量的減低均有明顯抑制作用,起到對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用。本研究為L(zhǎng)OX-1作為靶基因治療動(dòng)脈粥樣硬化提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院組織工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;莘縣人民醫(yī)院;
【關(guān)鍵詞】： 血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體 RNA干擾 細(xì)胞間黏附分子 單核細(xì)胞趨化蛋白 一氧化氮 RhoA/Rho激酶
【基金】：遼寧省科技廳社會(huì)發(fā)展攻關(guān)計(jì)劃(2011225015) 遼寧醫(yī)學(xué)院校長(zhǎng)基金-奧鴻博澤研究生科研創(chuàng)新基金
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)是一種炎癥性疾病,其病因還沒(méi)有被完全闡明,內(nèi)皮功能障礙目前被認(rèn)為是啟動(dòng)As最重要的步驟之一[1]。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是As發(fā)病的主要危險(xiǎn)因素之一,可誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷,在As的發(fā)生發(fā)展中起著重要作

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前3條

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【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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2 歐陽(yáng)新平;周壽紅;田紹文;李興;何平平;尹蔚蘭;周鈺娟;唐朝克;;檳榔堿對(duì)泡沫細(xì)胞膽固醇流出和ABCA1表達(dá)的影響[J];中國(guó)動(dòng)脈硬化雜志;2012年04期

3 李廣;戴愛(ài)國(guó);;大鼠肺動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)及低氧對(duì)缺氧誘導(dǎo)因子-1α的影響[J];腫瘤藥學(xué);2011年02期

4 宗小娟;王海昌;周祥;于進(jìn);程康;欒榮華;;氧化型低密度脂蛋白對(duì)骨髓內(nèi)皮前體細(xì)胞增殖和細(xì)胞功能及凋亡的影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2007年02期

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6 高麗娜;張榮慶;李霜;尹志勇;范偉偉;王海昌;曹豐;;Ghrelin對(duì)缺氧復(fù)氧狀態(tài)下脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞保護(hù)作用的研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年05期

7 王麗曄;李峰;宋月晗;馬佳美;李思耐;關(guān)冰河;;Ghrelin發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)的研究現(xiàn)狀[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2011年18期

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9 季亢挺;柴俊德;唐疾飛;林加鋒;楊鵬麟;;氧化低密度脂蛋白對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞功能的影響及丹參素的保護(hù)作用[J];中華中醫(yī)藥學(xué)刊;2009年07期

10 馬鳳霞;任倩;韓忠朝;;植物血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體介導(dǎo)氧化型低密度脂蛋白對(duì)內(nèi)皮祖細(xì)胞存活和功能的影響[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院學(xué)報(bào);2007年03期

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本文編號(hào)：885923