本文關鍵詞：RNA干擾LOX-1表達對氧化型低密度脂蛋白誘導人臍靜脈內(nèi)皮細胞損傷的保護機制

  更多相關文章： 血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體 RNA干擾 細胞間黏附分子 單核細胞趨化蛋白 一氧化氮 RhoA/Rho激酶

【摘要】：目的構建血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體1(LOX-1)基因的RNA干擾慢病毒載體并轉染人臍靜脈內(nèi)皮細胞。觀察干擾LOX-1表達后對氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)誘導內(nèi)皮細胞損傷的保護機制。方法針對已經(jīng)篩選確定的小干擾RNA有效干擾序列,合成慢病毒LV-si-OLR1最佳干擾序列,測定滴度。轉染人臍靜脈內(nèi)皮細胞96 h后,通過熒光顯微鏡觀察轉染效率,逆轉錄聚合酶鏈反應和Western blot檢測LOX-1的抑制效率。轉染72 h后加入150 mg/L ox-LDL處理24 h;噻唑藍比色法檢測細胞存活率;硝酸還原酶法檢測各組內(nèi)皮細胞培養(yǎng)液一氧化氮(NO)的含量;Western blot檢測各組細胞間黏附分子1(ICAM-1)、單核細胞趨化蛋白1(MCP-1)、RhoA、Rho激酶1(ROCK1)、Rho激酶2(ROCK2)的表達。結果測序結果證實,靶向人LOX-1的干擾慢病毒載體構建成功,包裝后慢病毒滴度為6×1011TU/L。轉染組與未轉染組比較,LOX-1 mRNA與蛋白的表達明顯減少(P0.01)。與正常對照組相比,ox-LDL處理組能明顯減低內(nèi)皮細胞的存活率及NO的生成量,增高ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2的表達(P0.05);與ox-LDL處理組相比,干擾LOX-1表達后對ox-LDL誘導的內(nèi)皮細胞存活率、NO生成量減低和ICAM-1、MCP-1、RhoA、ROCK1、ROCK2表達增高均有明顯抑制作用(P0.05)。結論干擾LOX-1表達,對ox-LDL誘導內(nèi)皮細胞引起的ICAM-1、MCP-1高表達和RhoA/Rho激酶信號通路的激活及細胞存活率、NO生成量的減低均有明顯抑制作用,起到對內(nèi)皮細胞損傷的保護作用。本研究為LOX-1作為靶基因治療動脈粥樣硬化提供了實驗依據(jù)。
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;遼寧醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院組織工程重點實驗室;莘縣人民醫(yī)院;
【關鍵詞】： 血凝素樣氧化型低密度脂蛋白受體 RNA干擾 細胞間黏附分子 單核細胞趨化蛋白 一氧化氮 RhoA/Rho激酶
【基金】：遼寧省科技廳社會發(fā)展攻關計劃(2011225015) 遼寧醫(yī)學院校長基金-奧鴻博澤研究生科研創(chuàng)新基金
【分類號】：R363
【正文快照】： 動脈粥樣硬化(atherosclerosis,As)是一種炎癥性疾病,其病因還沒有被完全闡明,內(nèi)皮功能障礙目前被認為是啟動As最重要的步驟之一[1]。氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein,ox-LDL)是As發(fā)病的主要危險因素之一,可誘導內(nèi)皮細胞損傷,在As的發(fā)生發(fā)展中起著重要作

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本文編號：885923