本文關(guān)鍵詞：酵母雙雜交篩選與CVB3 3A相互作用的人心臟蛋白

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【摘要】：目的以CVB3非結(jié)構(gòu)蛋白3A為誘餌,從人心臟cDNA文庫(kù)中篩選與其相互作用的宿主蛋白,對(duì)陽(yáng)性cDNA克隆進(jìn)行初步分析和鑒定。方法構(gòu)建pGBKT7-3A重組質(zhì)粒,Western Blot檢測(cè)3A融合蛋白的表達(dá);利用酵母雙雜交技術(shù)篩選人心臟cDNA文庫(kù),經(jīng)PCR擴(kuò)增cDNA插入片段和Alu I酶切等實(shí)驗(yàn)將陽(yáng)性克隆歸類,并通過(guò)測(cè)序、相似性比對(duì)分析和回返配合實(shí)驗(yàn)去除假陽(yáng)性蛋白。結(jié)果成功構(gòu)建誘餌質(zhì)粒pGBKT7-3A,Western Blot結(jié)果表明,pGBKT7-3A重組質(zhì)粒在酵母菌中成功表達(dá)3A融合蛋白;經(jīng)雙雜交篩選和回返配合實(shí)驗(yàn),獲得了7個(gè)相互作用的蛋白,分別為:蘭尼堿受體2(Ryanodine Receptor 2,RyR2),信號(hào)肽酶2(Signal peptidase complex subunit 2,SPCS2),跨膜蛋白emp24(Transmembrane emp24protein transport domain containing 4,TMED4),細(xì)胞色素c氧化酶亞基I(Cytochrome c oxidase subunit I,COX1),細(xì)胞色素c氧化酶亞基III(Cytochrome c oxidase subunit III,COX3),肌球蛋白重鏈(Myosin heavy chain,MYH7)和琥珀酸脫氫酶亞基D(Succinate dehydrogenase complex subunit D,SDHD)。結(jié)論應(yīng)用酵母雙雜交技術(shù),以CVB3 3A為誘餌蛋白,從人心臟cDNA文庫(kù)中獲得7種不同的陽(yáng)性基因:RyR2、SPCS2、TMED4、COX1、COX3、MYH7和SDHD,在分子水平上探索3A蛋白的新功能。
【作者單位】： 南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)系;南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系;
【關(guān)鍵詞】： 酵母雙雜交 CVB A
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81160196,No.30660010) 江西省青年科學(xué)家培養(yǎng)項(xiàng)目年度計(jì)劃資助(20133BCB23005) 江西省研究生創(chuàng)新專項(xiàng)資金項(xiàng)目(No.YC2012-S020)聯(lián)合資助~~
【分類號(hào)】：R373
【正文快照】： 柯薩奇B3病毒歸類于小RNA病毒科腸道病毒屬,能引起人類病毒性心肌炎、無(wú)菌性腦膜炎、胰腺炎,甚至新生兒死亡等多種疾病。腸道病毒基因組為單股正鏈RNA,長(zhǎng)約7.5kb,兩端為非編碼區(qū),中間為連續(xù)開(kāi)放讀碼框,編碼一個(gè)多聚蛋白。多聚蛋白經(jīng)酶切后形成病毒的結(jié)構(gòu)蛋白和非結(jié)構(gòu)蛋白,3A是

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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6 王，

本文編號(hào)：881089