本文關(guān)鍵詞：雌激素及雌激素受體α減輕谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷

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【摘要】：目的:建立谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型,觀察雌激素及雌激素受體α(estrogen receptorα,ERα)對谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷的作用。方法:原代培養(yǎng)小鼠大腦皮層神經(jīng)細胞,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫組化染色鑒定神經(jīng)元的純度。建立谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型。用前期實驗中已構(gòu)建成功的ERα重組慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞。實時熒光定量PCR和Western blotting檢測ERαmRNA和蛋白表達水平。實驗分為3組:(1)對照組:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞;(2)雌激素組:用雌激素干預經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞;(3)慢病毒組:用V-ERα-RFP-flag感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞。流式細胞術(shù)檢測各組神經(jīng)細胞凋亡率;實時熒光定量PCR及免疫熒光染色檢測各組神經(jīng)細胞中N-甲基-D-天冬氨酸受體1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的變化。結(jié)果:成功原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞,經(jīng)NSE免疫組化方法鑒定神經(jīng)元純度大于90%。成功建立經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神經(jīng)細胞72 h后,在熒光顯微鏡觀察下可見到紅色熒光表達,與對照病毒相比,能增加神經(jīng)細胞中ERαmRNA和蛋白表達水平(P0.01)。與對照組相比,雌激素組和慢病毒組細胞凋亡率降低(P0.05),且實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,雌激素組和慢病毒組的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表達降低(P0.05),免疫熒光實驗結(jié)果提示NMDAR1和VGLUT1陽性的細胞數(shù)減少(P0.01)。結(jié)論:雌激素和ERα能減輕谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷效應,該保護作用可能通過抑制NMDAR1和VGLUT1的表達來實現(xiàn)。
【作者單位】： 貴州省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;臨沂市婦幼保健院兒科;貴州省人民醫(yī)院小兒內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 雌激素 雌激素受體α 谷氨酸 神經(jīng)元
【基金】：貴州省科技廳攻關(guān)項目(No.黔科合sy[2009]3054) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長專項資金資助項目(No.黔省專合字[2010]86)
【分類號】：R363
【正文快照】： 谷氨酸(glutamate,Glu)廣泛分布于哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS),是腦內(nèi)含量最豐富的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),在突觸可塑性和介導突觸興奮性活動等方面發(fā)揮著重要的作用。Glu的受體,特別是N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在突觸可塑

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本文編號：868830