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雌激素及雌激素受體α減輕谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷

發(fā)布時間:2017-09-17 10:17

  本文關(guān)鍵詞:雌激素及雌激素受體α減輕谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷


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【摘要】:目的:建立谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型,觀察雌激素及雌激素受體α(estrogen receptorα,ERα)對谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷的作用。方法:原代培養(yǎng)小鼠大腦皮層神經(jīng)細胞,神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)免疫組化染色鑒定神經(jīng)元的純度。建立谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型。用前期實驗中已構(gòu)建成功的ERα重組慢病毒(V-ERα-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞。實時熒光定量PCR和Western blotting檢測ERαmRNA和蛋白表達水平。實驗分為3組:(1)對照組:用空慢病毒(V-RFP-flag)感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞;(2)雌激素組:用雌激素干預經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞;(3)慢病毒組:用V-ERα-RFP-flag感染經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞。流式細胞術(shù)檢測各組神經(jīng)細胞凋亡率;實時熒光定量PCR及免疫熒光染色檢測各組神經(jīng)細胞中N-甲基-D-天冬氨酸受體1(N-methyl-D-aspartate receptor 1,NMDAR1)及囊泡膜谷氨酸轉(zhuǎn)運體蛋白1(vesicular glutamate transporter protein 1,VGLUT1)的變化。結(jié)果:成功原代培養(yǎng)神經(jīng)細胞,經(jīng)NSE免疫組化方法鑒定神經(jīng)元純度大于90%。成功建立經(jīng)谷氨酸誘導的神經(jīng)細胞損傷模型。MOI=7的V-ERα-RFP-flag感染神經(jīng)細胞72 h后,在熒光顯微鏡觀察下可見到紅色熒光表達,與對照病毒相比,能增加神經(jīng)細胞中ERαmRNA和蛋白表達水平(P0.01)。與對照組相比,雌激素組和慢病毒組細胞凋亡率降低(P0.05),且實時熒光定量PCR結(jié)果顯示,雌激素組和慢病毒組的NMDAR1和VGLUT1 mRNA表達降低(P0.05),免疫熒光實驗結(jié)果提示NMDAR1和VGLUT1陽性的細胞數(shù)減少(P0.01)。結(jié)論:雌激素和ERα能減輕谷氨酸對神經(jīng)細胞的損傷效應,該保護作用可能通過抑制NMDAR1和VGLUT1的表達來實現(xiàn)。
【作者單位】: 貴州省人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;臨沂市婦幼保健院兒科;貴州省人民醫(yī)院小兒內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】雌激素 雌激素受體α 谷氨酸 神經(jīng)元
【基金】:貴州省科技廳攻關(guān)項目(No.黔科合sy[2009]3054) 貴州省優(yōu)秀科技教育人才省長專項資金資助項目(No.黔省專合字[2010]86)
【分類號】:R363
【正文快照】: 谷氨酸(glutamate,Glu)廣泛分布于哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS),是腦內(nèi)含量最豐富的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),在突觸可塑性和介導突觸興奮性活動等方面發(fā)揮著重要的作用。Glu的受體,特別是N-甲基-D-天冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)在突觸可塑

【參考文獻】

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3 苗玉連;武傳龍;劉金波;江蓓;張曉黎;;白藜蘆醇對高脂飲食去卵巢肥胖大鼠海馬組織腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子水平的影響[J];中國病理生理雜志;2013年04期

【共引文獻】

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3 劉洋;李繼昌;;硫酸粘菌素誘導PC12細胞損傷模型的建立[J];中國飼料;2014年01期

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5 沈麗霞;張力;;雌激素神經(jīng)保護作用研究進展[J];神經(jīng)藥理學報;2012年03期

中國碩士學位論文全文數(shù)據(jù)庫 前4條

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3 張夏微;蛇床子素的雌激素樣作用對學習記憶的影響及機制的研究[D];河北北方學院;2013年

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【二級參考文獻】

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1 胡曉;王建怡;袁軍;萬興;黃偉琨;秦新月;;小鼠雌激素受體α重組慢病毒的構(gòu)建及其感染神經(jīng)細胞的鑒定[J];第二軍醫(yī)大學學報;2011年02期

2 胡曉;萬興;婁磊;王建怡;;小鼠雌激素受體α基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];第四軍醫(yī)大學學報;2009年23期

3 任鐵玲,胡前勝,傅洪軍,董勝璋;大鼠海馬神經(jīng)元無血清原代培養(yǎng)技術(shù)的建立[J];中國衛(wèi)生檢驗雜志;2004年02期

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【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

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10 張s,

本文編號:868830


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