本文關(guān)鍵詞：Plackett-Burman與響應(yīng)面法相結(jié)合優(yōu)化化學(xué)成分明確的MDCK細(xì)胞無血清無蛋白培養(yǎng)基

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【摘要】：目的采用Plackett-Burman與響應(yīng)面法相結(jié)合優(yōu)化化學(xué)成分明確的MDCK細(xì)胞無血清無蛋白培養(yǎng)基。方法在自主研發(fā)的含蛋白無血清培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上,通過Plackett-Burman試驗(yàn)和響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì)考察23組營養(yǎng)物質(zhì)對MDCK細(xì)胞生長的影響,以細(xì)胞比生長速率、維持時間及最大活細(xì)胞密度作為響應(yīng)值進(jìn)行篩選和定量優(yōu)化。以最優(yōu)化的因子濃度配制化學(xué)成分明確的無血清無蛋白培養(yǎng)基,分別于細(xì)胞培養(yǎng)板和攪拌瓶中培養(yǎng)MDCK細(xì)胞,考察細(xì)胞比生長速率、維持時間和最大活細(xì)胞密度3個響應(yīng)值的大小。結(jié)果通過Plackett-Burman試驗(yàn)篩選出4種對MDCK細(xì)胞生長具有顯著性促進(jìn)作用的因子:半胱氨酸、蘇氨酸、亮氨酸和葡萄糖,蘇氨酸和亮氨酸有助于提高細(xì)胞比生長速率,半胱氨酸和葡萄糖有利于提高最大活細(xì)胞密度;該化學(xué)成分明確的無血清無蛋白培養(yǎng)基能很好地支持MDCK細(xì)胞懸浮生長,單細(xì)胞懸浮培養(yǎng)MDCK細(xì)胞時,細(xì)胞比生長速率可達(dá)0.058/h,最大活細(xì)胞密度可達(dá)32.65×105個/ml,分別比基礎(chǔ)培養(yǎng)基提高了2.15和3.09倍。結(jié)論采用Plackett-Burman與響應(yīng)面法相結(jié)合優(yōu)化了化學(xué)成分明確的MDCK細(xì)胞無血清無蛋白培養(yǎng)基,為采用MDCK細(xì)胞大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)流感疫苗奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 華東理工大學(xué)生物反應(yīng)器工程國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;上海生物制品研究所有限責(zé)任公司第四研究室;
【關(guān)鍵詞】： MDCK細(xì)胞 無蛋白培養(yǎng)基 Plackett-Burman試驗(yàn)設(shè)計(jì) 響應(yīng)面分析
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(21206040) 國家科技重大專項(xiàng)基金資助項(xiàng)目(2013ZX10004003-003-003)
【分類號】：R392
【正文快照】： 近年來,動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)迅速發(fā)展,已成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)研究、生物藥物生產(chǎn)和應(yīng)用中廣泛采用的技術(shù)方法,而培養(yǎng)基是動物細(xì)胞培養(yǎng)中的重要因素,其提供適合細(xì)胞生存、擴(kuò)增的合適pH和滲透壓,以及一些細(xì)胞需要但自身無法合成的大分子化學(xué)物質(zhì),是動物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的核心之一。傳統(tǒng)

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本文編號：853616