發(fā)布時間：2017-09-14 17:28

  本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的shRNA對A549細(xì)胞Pin1表達(dá)的干擾作用

  更多相關(guān)文章： 肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(Pin) 慢病毒載體 A細(xì)胞 基因表達(dá)

【摘要】：目的構(gòu)建Pin shRNA慢病毒載體,建立穩(wěn)定抑制肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶1(Pin1)表達(dá)的A549細(xì)胞系。方法根據(jù)查閱文獻(xiàn)獲得Pin1shRNA干擾靶點序列并插入pLenR-GPH載體,構(gòu)建pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒載體,隨后轉(zhuǎn)入人胚腎HEK293T細(xì)胞中,收集其上清進(jìn)行病毒滴度測定,再行慢病毒的包裝,將獲得的慢病毒毒液感染A549細(xì)胞。通過實時定量PCR(qRT-PCR)及Western blot法檢測Pin1在不同組的表達(dá)抑制情況。結(jié)果經(jīng)限制性內(nèi)切酶鑒定及測序分析,成功構(gòu)建了pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒載體質(zhì)粒,包裝并得到高滴度的病毒顆粒。通過qRT-PCR和Western blot法檢測顯示,與對照組相比,pLenR-GPH-Pin1shRNA慢病毒載體感染的A549細(xì)胞中Pin1的表達(dá)在mRNA和蛋白水平均有所下降。結(jié)論慢病毒介導(dǎo)的shRNA能夠有效下調(diào)A549細(xì)胞中Pin 1的表達(dá)。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院新生兒科;
【關(guān)鍵詞】： 肽基脯氨酰順反異構(gòu)酶(Pin) 慢病毒載體 A細(xì)胞 基因表達(dá)
【基金】：中華兒科雜志第二屆雙鶴珂立蘇科研基金(2010年) 四川省教育廳科研基金(08ZA150) 四川省衛(wèi)生廳科研基金(90191)
【分類號】：R346
【正文快照】： 新生兒特別是早產(chǎn)兒的救治過程,常需要吸入高體積分?jǐn)?shù)氧(高氧),部分患兒在早期易導(dǎo)致急性肺損傷,繼而可能發(fā)展至肺纖維化及支氣管肺發(fā)育不良,嚴(yán)重影響患兒生活質(zhì)量[1]。目前,高氧肺損傷的發(fā)病機(jī)制尚未闡明,研究顯示,在高氧環(huán)境下線粒體發(fā)生氧化應(yīng)激反應(yīng),炎性細(xì)胞激活[2],產(chǎn)生

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 盧美燕;董文斌;;氧化應(yīng)激在高體積分?jǐn)?shù)氧肺損傷中的作用[J];實用兒科臨床雜志;2012年22期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 車忠麗;董文斌;李清平;雷小平;康蘭;郭琳;翟雪松;陳楓;;PKCβ/p66Shc氧化應(yīng)激通路介導(dǎo)高氧誘導(dǎo)人肺泡上皮細(xì)胞凋亡的作用[J];臨床兒科雜志;2013年11期

2 戴禎;王鐵東;王侃侃;歐陽紅生;涂長春;逄大欣;;高效抗豬瘟病毒shRNA的篩選[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2014年02期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙輝;eIF4E對食管癌化療藥物敏感性的作用機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2013年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 黨嘉文;孫鴻燕;董文斌;李清平;馮志強(qiáng);翟雪松;雷小平;;小窩蛋白-1在早產(chǎn)鼠高體積分?jǐn)?shù)氧肺損傷中的表達(dá)及其意義[J];實用兒科臨床雜志;2011年12期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李振宇;徐開林;潘秀英;鹿群先;何徐彭;孫海英;;慢病毒載體介導(dǎo)不同內(nèi)部啟動子驅(qū)動綠色熒光蛋白表達(dá)效率[J];江蘇醫(yī)藥;2006年05期

2 馬強(qiáng);李明;董文其;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備體系的初步建立[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2007年08期

3 韓濤;郜金榮;吳正輝;李惠平;葉林柏;;艾滋病的基因治療策略及慢病毒載體[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;2007年03期

4 馬強(qiáng);李明;董文其;吳英松;;一種新型慢病毒載體制備方法的建立[J];生物工程學(xué)報;2007年05期

5 王峰;陳琳;邵建國;;慢病毒綠色熒光蛋白感染人胰腺癌細(xì)胞株CFPAC-1的效率觀察[J];南通大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

6 竇立萍;達(dá)萬明;王暢;康慧媛;趙瑜;孫敬芬;靳海杰;王全順;高春記;于力;;Kir2ds4基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2008年03期

7 焦伊勝;王永來;張淑蘭;王桂玲;;凋亡蛋白抑制因子Livin shRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2008年24期

8 周磊;陳婕;徐欣;張敏;張新;;利用重組慢病毒載體建立穩(wěn)定表達(dá)綠色熒光蛋白細(xì)胞系[J];中國臨床醫(yī)學(xué);2009年02期

9 張樂;官國先;;SATB1基因RNAi慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[J];中國實用醫(yī)藥;2009年14期

10 羅毅;王小聰;鄒萍;;Pir-b基因慢病毒載體的構(gòu)建和表達(dá)[J];中國實驗血液學(xué)雜志;2009年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 王海彬;;雌激素相關(guān)受體α基因超表達(dá)慢病毒載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第六次全國骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病學(xué)術(shù)會議暨中華醫(yī)學(xué)會骨質(zhì)疏松和骨礦鹽疾病分會成立十周年論文匯編[C];2011年

2 高書穎;于潔;;攜帶hTERT基因的重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[A];“細(xì)胞活動 生命活力”——中國細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會全體會員代表大會暨第十二次學(xué)術(shù)大會論文摘要集[C];2011年

3 蔡偉光;丁景華;習(xí)欠云;肖敏;江青艷;吳珍芳;張永亮;;慢病毒與精子孵育法介導(dǎo)轉(zhuǎn)基因豬的制備[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

4 徐敏;楊曉紅;陳龍;葉靜;李么明;陳煥春;曹勝波;;慢病毒載體介導(dǎo)表達(dá)西尼羅河病毒prME蛋白[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會第二次學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2010年

5 于潔;高書穎;;攜帶hTERT基因的重組慢病毒載體的構(gòu)建[A];中國的遺傳學(xué)研究——遺傳學(xué)進(jìn)步推動中國西部經(jīng)濟(jì)與社會發(fā)展——2011年中國遺傳學(xué)會大會論文摘要匯編[C];2011年

6 劉峰;肖興鵬;田玉科;;大鼠蛋白激酶Cγ可控shRNA慢病毒的構(gòu)建與鑒定[A];2011年全國醫(yī)藥學(xué)術(shù)論壇交流會暨臨床藥學(xué)與藥學(xué)服務(wù)研究進(jìn)展培訓(xùn)班論文集[C];2011年

7 宋喜;張克讓;;慢病毒介導(dǎo)的過表達(dá)GSK3β小鼠與抑郁障礙發(fā)生的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會精神病學(xué)分會第九次全國學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

8 劉競;余鋒;桂嶸;李昕;蔣鐵斌;王二華;李穎;王成紅;唐雪元;陳方平;;Survivin shRNA慢病毒載體構(gòu)建[A];第13屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要[C];2011年

9 于福先;潘建治;朱志偉;陳曉宇;;豬白介素1 5(IL-1 5)基因克隆及其慢病毒載體的構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會動物繁殖學(xué)分會第十五屆學(xué)術(shù)研討會論文集（上冊）[C];2010年

10 薛美思;劉毅;;攜帶人胰島素基因慢病毒載體轉(zhuǎn)染臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的實驗研究[A];中華醫(yī)學(xué)會整形外科學(xué)分會第十一次全國會議、中國人民解放軍整形外科學(xué)專業(yè)委員會學(xué)術(shù)交流會、中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會醫(yī)學(xué)美容專業(yè)委員會全國會議論文集[C];2011年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前8條

1 辛紫;中國倆科學(xué)家創(chuàng)新項目入選[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2009年

2 本報記者 鄭靈巧;十萬美元驗證一個新點子[N];健康報;2009年

3 張?zhí)锟?基因療法:沉寂之后的復(fù)蘇?[N];南方周末;2009年

4 記者 任海軍;基因療法卷土重來 人類頑疾有望治愈[N];經(jīng)濟(jì)參考報;2010年

5 記者 徐亞靜;抑制VCAM——1表達(dá)可減少頸動脈術(shù)后再狹窄[N];中國醫(yī)藥報;2010年

6 記者 師巧梅;我區(qū)綿羊轉(zhuǎn)基因研究取得重大突破[N];新疆日報(漢);2010年

7 記者 王菲 胡江;新疆科學(xué)家“破解”綿羊轉(zhuǎn)基因技術(shù)“密碼”[N];新疆科技報(漢);2010年

8 記者 王小龍;人造病毒可給艾滋病病毒定位[N];科技日報;2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 韋燁;基因改造骨髓造血干細(xì)胞靶向抑制結(jié)直腸癌新生血管形成的實驗研究[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

2 俞曉嵐;過表達(dá)CXCR4的骨髓間質(zhì)干細(xì)胞移植治療大鼠腦梗死的療效觀察[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

3 劉瑜;BTBD10在人腦膠質(zhì)瘤中的表達(dá)及其對U251細(xì)胞株增殖和凋亡的影響[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

4 林恒;線粒體轉(zhuǎn)錄因子A在重組人肝再生增強(qiáng)因子對梗阻性黃疸大鼠肝功能保護(hù)中的作用機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

5 林文平;腦紅蛋白基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對兔脊髓損傷保護(hù)作用的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

6 王鵬;依賴p53的癌基因Wip1在人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞惡性增殖機(jī)制中的作用研究[D];華中科技大學(xué);2010年

7 呂學(xué)軍;Caveolin-1在LPS誘導(dǎo)AT-1細(xì)胞和小鼠肺部急性損傷中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2010年

8 蘇冠華;肝細(xì)胞生長因子基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的促血管新生作用[D];華中科技大學(xué);2010年

9 楊志峰;應(yīng)用慢病毒載體介導(dǎo)RNA干擾在MCF-7細(xì)胞中剔降IKKα基因和制備轉(zhuǎn)基因小鼠模型的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 陳柏齡;慢病毒載體介導(dǎo)血管生成素-1基因修飾的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療腦梗死的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 馬貴亮;慢病毒載體介導(dǎo)的TNF-α基因在臍血間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)的實驗研究[D];青島大學(xué);2010年

2 欒沖;可誘導(dǎo)表達(dá)hBMP-2基因的慢病毒載體的構(gòu)建及其慢病毒的產(chǎn)生和鑒定[D];青島大學(xué);2010年

3 陳豪;乙肝病毒X基因（HBVX）慢病毒載體的構(gòu)建和鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

4 陳春;攜帶大鼠Foxp3基因慢病毒載體的構(gòu)建及慢病毒包裝的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

5 沈上杭;短發(fā)夾RNA抑制缺氧誘導(dǎo)因子-1α表達(dá)對腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

6 盛鵬程;綿羊Myostatin基因shRNA慢病毒載體的構(gòu)建與鑒定[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 魏衍全;慢病毒介導(dǎo)shRNA穩(wěn)定持續(xù)抑制口蹄疫病毒增殖的兩類細(xì)胞系的建立[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

8 劉偉;小鼠趨化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因重組慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

9 張曉宇;含LfcinB基因慢病毒載體的構(gòu)建及體外對SKOV3細(xì)胞作用的研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2011年

10 張國峰;慢病毒載體介導(dǎo)的RNAi抑制牛整聯(lián)蛋白亞基αv基因表達(dá)的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2011年

，

本文編號：851344