本文關(guān)鍵詞：PEI增強(qiáng)G250 DNA疫苗和重組肽疫苗的prime-boost免疫策略研究

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【摘要】：目的 :探討PEI作為免疫佐劑對(duì)G250抗原肽基因PVAX1/C-G250肽-C免疫保護(hù)效果的增強(qiáng)作用及聯(lián)合應(yīng)用CAIX蛋白疫苗進(jìn)行PRIME—BOOST免疫程序免疫增強(qiáng)效果。方法:用Eco R I、Xho I和Eco R I、Sal I分別雙酶切PVAX1及既往構(gòu)建的p ET28a(+)/C-G250肽-C質(zhì)粒。利用DNA重組技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒PVAX1/C-G250肽-C,酶切分析鑒定。大量提取質(zhì)粒并分光光度計(jì)測(cè)質(zhì)粒含量。將32只雌性昆明小鼠隨機(jī)分為(A)裸DNA組,(B)DNA-PEI復(fù)合物組,(C)DNA-PEI+蛋白疫苗組,(D)空白對(duì)照組。按0,10,20,30天程序經(jīng)股四頭肌注射免疫。C組在第20天及第30天進(jìn)行蛋白沖擊。初次免疫前和第40天鼠尾取血,ELISA法檢測(cè)抗體滴度。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)淋巴細(xì)胞亞群CD4+和CD8+。結(jié)果:酶切及基因測(cè)序鑒定證實(shí)G250抗原肽c DNA正確插入PVAX1/C-G250肽-C真核表達(dá)的重組質(zhì)粒中。昆明小鼠經(jīng)4次免疫后,3個(gè)實(shí)驗(yàn)組都產(chǎn)生了特異性的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng),B組的抗體滴度1:1.28×104及CD4+、CD8+達(dá)26.12%和12.60%,明顯高于A組的1:3.2×103和CD4+,CD8+占到19.32%和10.74%。而蛋白沖擊組的1:5.12×104和CD4+,CD8+占到41.96%和15.14%,明顯高于B組(P0.05)。結(jié)論:成功構(gòu)建重組質(zhì)粒PVAX1/C-G250肽-C。該DNA疫苗與PEI和G250蛋白疫苗聯(lián)合使用后產(chǎn)生極強(qiáng)的免疫原性,誘導(dǎo)產(chǎn)生了高滴度、高特異性抗體及細(xì)胞免疫反應(yīng)。證實(shí)G250DNA疫苗聯(lián)合PEI使用并進(jìn)行蛋白疫苗沖擊的免疫策略可產(chǎn)生強(qiáng)大的免疫保護(hù)作用。為惡性腫瘤的術(shù)后輔助治療提供新的思路和方法。
【作者單位】： 山東大學(xué)附屬山東省千佛山醫(yī)院泌尿外科;山東大學(xué)附屬省立醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;西安華廣生物工程有限公司;山東大學(xué)齊魯醫(yī)院肝膽外科;
【關(guān)鍵詞】： DNA疫苗 G PEI 佐劑 prime-boost
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： G250蛋白即碳酸酐酶-9(CAⅨ)是碳酸酐酶家族的異構(gòu)體,是一種重要的缺氧相關(guān)蛋白,其通過減少鈣黏蛋白的表達(dá)而減少細(xì)胞間的黏附作用,從而增加腫瘤的轉(zhuǎn)移性。相關(guān)研究顯示,在正常組織中,G250表達(dá)極低,僅在胃、胰腺、小腸上皮中散在發(fā)現(xiàn)。在胃癌、腎細(xì)胞癌、肝癌、非小細(xì)胞肺癌、，

本文編號(hào)：848783