本文關(guān)鍵詞：細(xì)粒棘球蚴Eg95蛋白減毒沙門氏菌重組株的構(gòu)建與免疫原性分析

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【摘要】：目的探討以減毒鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella typhimurium)為載體構(gòu)建細(xì)粒棘球蚴口服活載體疫苗的可行性。方法將細(xì)粒棘球蚴Eg95基因插入到表達(dá)載體p YA3341中,構(gòu)建重組質(zhì)粒p YA3341-Eg95,并用PCR和酶切鑒定。將重組質(zhì)粒先后電轉(zhuǎn)入減毒沙門氏菌X3770和X4550,獲得重組菌株St-Eg95,蛋白質(zhì)印跡(Western blotting)分析重組菌Eg95蛋白的表達(dá)情況。將重組菌St-Eg95體外培養(yǎng)傳10代,每隔一代提取質(zhì)粒,利用PCR鑒定重組質(zhì)粒的穩(wěn)定性。BALB/c小鼠30只,隨機(jī)均分為6組,其中4組分別經(jīng)口灌胃給予St-Eg95 1×109、1×1010、1×1011和1×1012 cfu/ml,100μl/只,余下2組分別經(jīng)口灌胃給予等體積野生型沙門氏菌1×107 cfu/ml和PBS,常規(guī)飼養(yǎng)30 d,觀察生存情況。另取15只BALB/c小鼠,均分為3組,分別為St-Eg95免疫組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,St-Eg95組和陰性對(duì)照組按5×1010cfu/ml劑量的重組菌和陰性菌分別經(jīng)口灌胃免疫小鼠,0.5 ml/(只·次),共2次,間隔2周。分別于免疫前和末次免疫后2、4和6周采血,收集血清。用細(xì)粒棘球蚴Ig G抗體檢測(cè)試劑盒(間接ELISA)檢測(cè)Eg95蛋白的Ig G抗體滴度。于末次免疫后6周處死小鼠,用噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)特異性脾淋巴細(xì)胞增殖活性。結(jié)果經(jīng)PCR和酶切鑒定表明,重組質(zhì)粒p YA3341-Eg95構(gòu)建成功,在重組菌St-Eg95中有目的蛋白Eg95的表達(dá),相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)約為18 000,與預(yù)期大小一致。重組菌傳10代后,PCR仍可擴(kuò)增到約486 bp的Eg95基因片段。安全性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,灌胃給予重組菌和PBS的小鼠30 d后均存活,活動(dòng)正常;給予野生型沙門氏菌的小鼠均于4 d后死亡。間接ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示,末次免疫后2周St-Eg95組小鼠特異性Ig G抗體水平即明顯升高,顯著高于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組(P0.05);末次免疫后4周抗體水平達(dá)到最高值,約1∶1 700。小鼠淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)結(jié)果顯示,末次免疫后6周,St-Eg95組小鼠的脾淋巴細(xì)胞刺激指數(shù)(SI值)達(dá)到1.94±0.15,顯著高于陰性對(duì)照組(1.14±0.12)和空白對(duì)照組(1.03±0.03)(P0.05)。結(jié)論構(gòu)建了能穩(wěn)定表達(dá)細(xì)粒棘球蚴Eg95蛋白的口服減毒沙門氏菌重組株,并具有良好的免疫原性和安全性。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;
【關(guān)鍵詞】： 細(xì)粒棘球蚴 Eg 減毒沙門氏菌 免疫原性
【基金】：寧夏自然科學(xué)基金(No.NZ12199) 寧夏衛(wèi)生廳項(xiàng)目(No.2013125) 寧夏醫(yī)科大學(xué)校級(jí)面上項(xiàng)目(No.XM2012032)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 細(xì)粒棘球蚴病,是由細(xì)粒棘球絳蟲(Echinococ-cus granulosus)的幼蟲引起的一種人獸共患寄生蟲病[1,2]。寧夏是我國棘球蚴病的高發(fā)區(qū)之一,2011年中國疾病預(yù)防控制中心網(wǎng)絡(luò)直報(bào)系統(tǒng)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示,寧夏報(bào)告的棘球蚴病例數(shù)占全國總報(bào)告病例數(shù)的10.8%(324/3 013)[3]。通過疫

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本文編號(hào)：833919