本文關(guān)鍵詞：福氏志賀菌5a型M90T株GAPDH蛋白多克隆抗體的制備和鑒定

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【摘要】：目的制備高效的福氏志賀菌5a M90T3-磷酸甘油醛脫氫酶(GAPDH)的多克隆抗體,并對其特異性進(jìn)行評價。方法提取M90T的全基因組,采用PCR法擴(kuò)增M90T中的基因gapA克隆到原核表達(dá)載體pET-24中,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到大腸桿菌BL21(DE3)中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),條件優(yōu)化后純化GAPDH-His融合蛋白。以純化的融合蛋白作為抗原免疫BALB/c小鼠,制備該蛋白的多克隆抗體。Western blot法、ELISA鑒定獲得的抗血清。結(jié)果成功構(gòu)建了原核表達(dá)載體pET24a-gapA,通過一系列誘導(dǎo)條件的優(yōu)化,確定可溶性條件為30℃、1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)2 h。用純化的融合蛋白GAPDH-His作為抗原免疫小鼠制備多克隆抗體,Western blot法、ELISA證明多克隆抗體制備成功。結(jié)論成功制備了福氏志賀菌5a M90T特異性的小鼠多克隆抗體。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 福氏志賀菌aMT -磷酸甘油醛脫氫酶 多克隆抗體
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30970122)
【分類號】：R392-33
【正文快照】： 志賀氏菌,俗稱痢疾桿菌,定植在人的小腸上皮細(xì)胞內(nèi)引起人類腹瀉。報道稱,每年全球約有1.6億人感染,多數(shù)發(fā)生在衛(wèi)生條件差的發(fā)展中國家[1-2]。在福氏志賀菌(Shigella flexneri)5a M90T中,3-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde-3-phosphatedehydrogenase,GAPDH)是糖酵解的重要酶之

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 龔益熊;廖翔;朱力;吳蘭;周曉巍;梁龍;黃培堂;;雙向BN/SDS-PAGE分離鑒定痢疾桿菌福氏5型M90T株毒力相關(guān)膜蛋白復(fù)合物[J];生物技術(shù)通報;2011年09期

2 王羽;周圍;廖翔;魏波;冉金寶;高原;呼和巴特爾;岳俊杰;梁龍;;弗氏志賀菌5a型M90T株ClpB蛋白在大腸桿菌中的融合表達(dá)和純化[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 冉金寶;廖翔;周圍;王羽;魏波;高原;岳俊杰;梁龍;王純潔;;弗氏志賀菌M90T株毒力相關(guān)膜蛋白復(fù)合物組成基因缺失突變體的構(gòu)建[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

2 王羽;周圍;廖翔;魏波;冉金寶;高原;呼和巴特爾;岳俊杰;梁龍;;弗氏志賀菌5a型M90T株ClpB蛋白在大腸桿菌中的融合表達(dá)和純化[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

3 王羽;周圍;廖翔;高原;戴紅梅;岳俊杰;梁龍;呼和巴特爾;;志賀菌福氏5a M90T毒力蛋白Apyrase的表達(dá)、純化及多克隆抗體制備[J];中國免疫學(xué)雜志;2013年10期

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 冉金寶;福氏志賀氏菌M90T毒力相關(guān)膜蛋白復(fù)合物組成蛋白基因缺失突變體的構(gòu)建[D];內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 龔益熊;廖翔;朱力;吳蘭;周曉巍;梁龍;黃培堂;;雙向BN/SDS-PAGE分離鑒定痢疾桿菌福氏5型M90T株毒力相關(guān)膜蛋白復(fù)合物[J];生物技術(shù)通報;2011年09期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蘇潔;王斌;魯曉晴;趙巍;閆志勇;錢冬萌;丁守怡;宋旭霞;楊麗;劉海燕;;D2蛋白酶間接ELISA檢測方法的建立[J];中國生物制品學(xué)雜志;2010年02期

2 李淑娟;牛育鴻;;金磁微粒介導(dǎo)的抗六聚組氨酸多克隆抗體的純化[J];陜西科技大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2010年05期

3 宋希云,高文淑,劉新,劉廣田,黃鐵城,夏日升;利用雞蛋黃制備普通小麥高分子量谷蛋白亞基多克隆抗體的研究[J];農(nóng)業(yè)生物技術(shù)學(xué)報;1996年03期

4 謝忠平,崔萍芳,宋霞,李華,龍潤?quán)l(xiāng),洪超,熊秋霞,李文忠,李琦涵;利用HCV多表位復(fù)合抗原制備高效價抗體[J];中國生物制品學(xué)雜志;2005年04期

5 侯秋蓮,王靜,劉勝旺,孔憲剛,韓宗璽,冉多良;鵝細(xì)小病毒vp2基因片段在原核系統(tǒng)中的表達(dá)及多克隆抗體的制備[J];中國病毒學(xué);2005年04期

6 王弘s，

本文編號：827161