發(fā)布時(shí)間：2017-09-10 04:50

  本文關(guān)鍵詞：人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng):胰蛋白酶及膠原酶消化時(shí)間及濃度的選擇

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【摘要】：背景:文獻(xiàn)報(bào)道人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞提取方法各不一致,得到的細(xì)胞數(shù)量各不相同。目的:探索人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分離培養(yǎng)的最適方法。方法:無菌條件下取正常足月剖腹產(chǎn)胎兒的羊膜剪成碎片,分別通過4個(gè)實(shí)驗(yàn)7種方法體外培養(yǎng)人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞。①實(shí)驗(yàn)一:分別采用3種方法:0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后,再加0.75 g/L膠原酶Ⅰ消化60 min;0.75 g/L膠原酶Ⅰ直接消化120 min;0.05 g/L胰蛋白酶與0.75 g/L膠原酶Ⅰ同時(shí)消化60 min。②實(shí)驗(yàn)二:采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后,再加0.75 g/L膠原酶Ⅰ消化30 min。③實(shí)驗(yàn)三:分別采用2種方法:0.05 g/L的胰蛋白酶連續(xù)2次消化30 min后,再加入0.75 g/L的Ⅰ型膠原酶消化60 min;0.05 g/L的胰蛋白酶連續(xù)2次消化40 min后,再加0.75 g/L膠原酶Ⅰ消化60 min。④實(shí)驗(yàn)四:采用0.05 g/L的胰蛋白酶連續(xù)2次消化30 min后,再加1 g/L的Ⅰ型膠原酶消化60 min。顯微鏡下觀察其形態(tài),研究人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞在體外分離培養(yǎng)的最適方法。結(jié)果與結(jié)論:用0.05 g/L的胰蛋白酶連續(xù)消化2次每次消化30 min,然后用1 g/L的膠原酶消化60 min是最合適的體外分離培養(yǎng)條件。細(xì)胞成細(xì)長梭形或星形,胞質(zhì)豐富,細(xì)胞核呈圓形,1-3個(gè)核仁。說明實(shí)驗(yàn)四采用的胰酶和膠原酶消化的時(shí)間合適,而且膠原酶的濃度合適,得到的細(xì)胞數(shù)量最多。
【作者單位】： 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物組織胚胎與發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 干細(xì)胞 培養(yǎng) 間充質(zhì)干細(xì)胞 羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng) 胰蛋白酶 膠原酶 項(xiàng)目
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展863項(xiàng)目(2008AA101005),課題名稱:家畜胚胎干細(xì)胞技術(shù)研究~~
【分類號】：R329
【正文快照】： 0引言Introduction干細(xì)胞是一種能夠自我更新且未分化的細(xì)胞,在一定的條件下,干細(xì)胞能夠分化成為多種成熟細(xì)胞類型。按照來源和分化潛能不同,干細(xì)胞可分為胚胎干細(xì)胞和成體干細(xì)胞兩類[1]。胚胎干細(xì)胞來源于早期的胚泡和胚胎內(nèi)層的細(xì)胞群,并且具有向3個(gè)胚層細(xì)胞分化的能力[2-3]

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7 張慧云;IL-12對肥大細(xì)胞蛋白酶激活受體表達(dá)和介質(zhì)分泌的影響[D];汕頭大學(xué);2007年

8 周濤;促紅細(xì)胞生成素聯(lián)合基質(zhì)細(xì)胞衍生因子-1在內(nèi)皮祖細(xì)胞促血管新生中作用的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2009年

9 王萬宗;體外三維培養(yǎng)條件下轉(zhuǎn)化生長因子β1基因轉(zhuǎn)染的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞促成軟骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 鄭華;少突膠質(zhì)系細(xì)胞的生物學(xué)特性及神經(jīng)保護(hù)作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 閆偉;胸腺五肽延緩小鼠皮膚成纖維細(xì)胞衰老的研究[D];天津大學(xué);2007年

2 黃偉;臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2005年

3 邱澤亮;人表皮干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)的研究[D];江西醫(yī)學(xué)院;2005年

4 趙靜;脂質(zhì)體介導(dǎo)轉(zhuǎn)染的綠色熒光蛋白基因在骨髓基質(zhì)細(xì)胞內(nèi)表達(dá)[D];山東大學(xué);2005年

5 黎海燕;新生大鼠海馬神經(jīng)干細(xì)胞的體外培養(yǎng)與誘導(dǎo)分化的研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2007年

6 吳建國;豬骨髓內(nèi)皮祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定的優(yōu)化方案[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2008年

7 費(fèi)良健;雪旺細(xì)胞體外分離培養(yǎng)及甲基強(qiáng)地松龍對雪旺細(xì)胞分泌功能影響的研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2008年

8 梁波;人羊膜間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與鑒定[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2009年

9 王海漩;人二倍體細(xì)胞及Vero細(xì)胞培養(yǎng)流感病毒的實(shí)驗(yàn)研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2007年

10 李雪峰;大鼠骨髓基質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)的生物學(xué)特性[D];山西醫(yī)科大學(xué);2007年

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本文編號：824845