本文關(guān)鍵詞：五種食源性致病菌多重PCR的條件優(yōu)化和檢出限分析

  更多相關(guān)文章： 多重PCR 擴(kuò)增條件 優(yōu)化 檢出限 食源性致病菌 食品安全

【摘要】：目的對(duì)沙門菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌O157∶H7、單核增生李斯特菌和福氏志賀菌5種食源性致病菌的多重PCR反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化并分析方法的DNA檢測(cè)限。方法根據(jù)沙門菌的invA基因、金黃色葡萄球菌的16S rDNA基因、大腸桿菌O157∶H7的eaeA基因、單核增生李斯特菌的hlyA基因和福氏志賀菌的ipaH基因設(shè)計(jì)5對(duì)特異性引物進(jìn)行多重PCR,對(duì)反應(yīng)條件包括鎂離子濃度、引物濃度和退火溫度進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn),并確定該檢測(cè)方法的檢出限。結(jié)果最佳反應(yīng)條件為金黃色葡萄球菌、沙門菌和福氏志賀菌引物濃度為0.25μmol/L,單核增生李斯特菌引物濃度為0.4μmol/L,大腸桿菌O157∶H7引物濃度為0.3μmol/L,Mg2+濃度為2.25 mmol/L,退火溫度為60℃;在此條件下金黃色葡萄球菌、腸炎沙門菌、大腸桿菌O157∶H7、單核增生李斯特菌、福氏志賀菌的多重PCR的DNA檢出限分別為6.4、32、32、800和160 pg。結(jié)論通過(guò)對(duì)5種引物的PCR條件進(jìn)行優(yōu)化和檢出限的分析,為食品中該5種致病菌的快速檢測(cè)奠定基礎(chǔ),對(duì)實(shí)際應(yīng)用具有指導(dǎo)意義。
【作者單位】： 西南民族大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： 多重PCR 擴(kuò)增條件 優(yōu)化 檢出限 食源性致病菌 食品安全
【基金】：教育部新世紀(jì)人才支持計(jì)劃(NCET-11-0847) 國(guó)家自然科學(xué)基金(31371781) 國(guó)家科技重大專項(xiàng)(201203009)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 世界范圍內(nèi),食物中毒事件每年都在頻繁暴發(fā)。據(jù)統(tǒng)計(jì)資料顯示,在病原清楚的暴發(fā)事件中,我國(guó)由微生物引起的食源性疾病暴發(fā)事件數(shù)和患者數(shù)最多,分別占42.4%和58.2%�？梢�(jiàn),由微生物引起的食源性疾病是目前主要的食品安全問(wèn)題[1]。其中,又以沙門菌(Salmonella)、金黃色葡萄球菌(St

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本文編號(hào)：824575