本文關(guān)鍵詞：固化床反應(yīng)器大規(guī)模灌注培養(yǎng)CHO-C28細(xì)胞生產(chǎn)乙型肝炎病毒表面抗原

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【摘要】：目的開(kāi)發(fā)一種應(yīng)用固定化反應(yīng)器大規(guī)模培養(yǎng)CHO-C28細(xì)胞的灌注培養(yǎng)工藝,用于制備重組乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)。方法利用自行研發(fā)的微型反應(yīng)器以軸向旋轉(zhuǎn)模擬固化床內(nèi)培養(yǎng)基流經(jīng)載體表面,分析固化床反應(yīng)器灌注培養(yǎng)CHO-C28細(xì)胞表達(dá)HBsAg的可行性;使用AP20小型固化床反應(yīng)器進(jìn)行小試工藝;將AP20反應(yīng)器消化后收集的2.3×1010個(gè)細(xì)胞接種至AP200固化床反應(yīng)器,對(duì)灌注工藝進(jìn)行中試放大,收獲培養(yǎng)液,測(cè)定溶氧、pH、葡萄糖、乳酸及HBsAg蛋白濃度,并與轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)工藝進(jìn)行比較。結(jié)果預(yù)裝無(wú)紡紙片的微型反應(yīng)器接種CHO-C28細(xì)胞后,可連續(xù)灌注培養(yǎng)60 d,HBsAg表達(dá)水平為1 100 ng/ml。AP20反應(yīng)器接種CHO-C28細(xì)胞后,HBsAg表達(dá)水平在維持期約1 100 ng/ml;將AP20反應(yīng)器培養(yǎng)至第10天的CHO-C28細(xì)胞消化后,收集2.3×1010個(gè)細(xì)胞,接種AP200反應(yīng)器,可連續(xù)灌注培養(yǎng)60 d,生長(zhǎng)期中,葡萄糖消耗速率最高可達(dá)450 g/d,維持期葡萄糖消耗速率降至250 g/d,整個(gè)維持期內(nèi)葡萄糖濃度維持在約1.5 g/L,收液中乳酸積累量為22 mmol/L,HBsAg表達(dá)水平約1 200 ng/ml。固化床灌注培養(yǎng)工藝的工藝條件控制精度高,培養(yǎng)環(huán)境更適合CHO-C28細(xì)胞生長(zhǎng),培養(yǎng)周期與轉(zhuǎn)瓶工藝相當(dāng)。結(jié)論固化床反應(yīng)器灌注培養(yǎng)CHO-C28細(xì)胞工藝與轉(zhuǎn)瓶工藝HBsAg表達(dá)水平相當(dāng),具備較高的產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用價(jià)值。
【作者單位】： 華北制藥集團(tuán)新藥研究開(kāi)發(fā)有限責(zé)任公司抗體藥物研制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;華北制藥金坦生物技術(shù)有限責(zé)任公司;
【關(guān)鍵詞】： 乙型肝炎表面抗原 反應(yīng)器 灌注培養(yǎng)
【分類(lèi)號(hào)】：R373.21
【正文快照】： 乙型肝炎(簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝)是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的病毒性傳染病。據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)統(tǒng)計(jì),目前全球約有2.4億人感染乙肝病毒(HBV),每年死于乙肝的患者達(dá)60萬(wàn)人[1]。目前,尚無(wú)治愈乙肝的特效藥,接種乙肝疫苗是唯一有效、安全的措施。我國(guó)于2002年正式將乙肝疫苗納入“計(jì)劃免疫”。目前

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本文編號(hào)：824257