本文關(guān)鍵詞：雞源與人源大腸桿菌主要耐藥基因檢測及其傳遞規(guī)律分析

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【摘要】：近年來,隨著遼寧省畜禽養(yǎng)殖規(guī)模迅速發(fā)展,大量抗菌藥物廣泛用于預(yù)防畜禽疾病,導(dǎo)致大腸桿菌耐藥性的產(chǎn)生和傳播越來越嚴(yán)重。為明確大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生的原因和發(fā)展趨勢,建立預(yù)防耐藥性產(chǎn)生和消除的方法,解決細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性對我國動(dòng)物疾病防治和公共衛(wèi)生安全帶來的危害,開展了雞源與人源大腸桿菌主要耐藥基因的檢測及同源性分析,并對其耐藥基因的傳遞規(guī)律進(jìn)一步分析驗(yàn)證,為指導(dǎo)臨床合理用藥及對人和動(dòng)物大腸桿菌病的防控提供科學(xué)依據(jù)。1.雞源大腸桿菌耐藥性跟蹤檢測對2012~2015年從遼寧省某規(guī)�；怆u養(yǎng)殖場分離獲得的218株雞源大腸桿菌,采用微量稀釋法進(jìn)行了14種獸用和16種人用抗菌藥的藥物敏感性測定,并參照CLSI制定的腸桿菌判定標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。結(jié)果顯示,雞源大腸桿菌對獸用藥氨芐西林、恩諾沙星、復(fù)方新諾明、磺胺異VA唑、四環(huán)素和人用藥哌拉西林、替卡西林、環(huán)丙沙星都產(chǎn)生顯著耐藥性,平均耐藥率達(dá)60%以上,而且其耐藥性總體上均呈現(xiàn)逐年上升的趨勢。對4年間所分離的雞源大腸桿菌耐藥性檢測結(jié)果與EUCAST發(fā)布的野生型菌株最小抑菌濃度(MIC)值分布進(jìn)行比較分析,耐藥范圍基本一致,但對大觀霉素、氨芐西林、恩諾沙星、復(fù)方新諾明等藥物的MIC值發(fā)生了明顯右移,表明該肉雞場大腸桿菌對上述抗菌藥的耐藥強(qiáng)度呈現(xiàn)逐漸增強(qiáng)的趨勢。耐藥率較高并逐年顯著增強(qiáng)的藥物品種,如四環(huán)素、氟苯尼考等均是雞場長期使用的藥物,說明細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生與長期使用密切相關(guān)。2.雞源與人源大腸桿菌耐藥基因檢測及同源性分析對分離獲得的雞源和人源大腸桿菌進(jìn)行14種獸用和16種人用抗菌藥的藥物敏感性測定,結(jié)果顯示,雞源和人源大腸桿菌共同產(chǎn)生表觀耐藥的獸用抗菌藥有10種,人用抗菌藥有6種。對分離菌株選取共同耐藥率較高的6類抗菌藥物的10種主要相關(guān)基因進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示雞源和人源大腸桿菌共同攜帶的耐藥基因有7種,其中g(shù)yrA和gyrB的檢出率均達(dá)到100%;對共同攜帶的耐藥基因進(jìn)行核苷酸同源性分析,結(jié)果顯示gyrB、sul2、TEM的同源性較高,分別為100%、99.55%、99.38%,mcr-1、floR、gyrA同源性也達(dá)到90%以上,分別為98.23%、97.75%、93.33%。研究表明該肉雞場雞源和人源大腸桿菌共同對多種常用獸用和人用抗菌藥產(chǎn)生表觀耐藥性,部分相關(guān)耐藥基因具有高度同源性,表明細(xì)菌耐藥性及其相關(guān)基因可能在肉雞場雞源和人源大腸桿菌中傳播。3.不同來源大腸桿菌耐藥菌株的同源性與耐藥性比較分析對分離獲得的雞源和人源大腸桿菌,應(yīng)用脈沖場凝膠電泳方法進(jìn)行分子分型鑒定,比較不同來源耐藥菌株的基因型,進(jìn)行遺傳相關(guān)性分析,以證明攜帶同種耐藥基因的菌株是否在雞和人以及不同個(gè)體之間傳播,并與大腸桿菌表觀耐藥譜型進(jìn)行比較分析。結(jié)果顯示,同一肉雞場內(nèi)動(dòng)物與飼養(yǎng)員及不同個(gè)體之間都存在PFGE圖譜完全相同的菌株。說明攜帶同種耐藥基因的菌株可能在肉雞和飼養(yǎng)員及不同個(gè)體中水平傳播。對不同來源大腸桿菌的PFGE分型和藥敏結(jié)果進(jìn)行比較可知,相同PFGE分型的菌株其耐藥譜型不一定相同,而不同PFGE分型的菌株其耐藥譜型可能相同。提示一是耐藥基因的復(fù)雜性和多樣性,二是同一克隆型的菌株在增殖播散的過程中可能存在耐藥質(zhì)粒的獲取或丟失導(dǎo)致耐藥性改變,而不同克隆株之間可能通過耐藥質(zhì)粒水平傳播耐藥性。4.攜帶耐藥基因大腸桿菌的轉(zhuǎn)接試驗(yàn)為確證雞源與人源大腸桿菌耐藥性是否發(fā)生水平傳播,對分離的耐藥菌株進(jìn)行質(zhì)粒轉(zhuǎn)化試驗(yàn),以攜帶可轉(zhuǎn)化成功質(zhì)粒的菌株作供體菌,大腸埃希菌J53作受體菌進(jìn)行質(zhì)粒接合轉(zhuǎn)移試驗(yàn),判定陽性質(zhì)粒是否發(fā)生交互傳播,檢測接合子耐藥性、耐藥基因及PFGE譜型。結(jié)果顯示,接合子檢出耐藥基因mcr-1、floR、sul2。耐藥性檢測接合子對所對應(yīng)的藥物多粘菌素、氟苯尼考和磺胺異VA唑產(chǎn)生了耐藥,說明耐藥基因可通過質(zhì)粒介導(dǎo)在大腸桿菌不同來源菌株之間水平傳播,進(jìn)而傳播耐藥性。研究證明雞源大腸桿菌如果存在較高耐藥性,就可能通過養(yǎng)殖環(huán)節(jié)向人源大腸桿菌傳遞。
【關(guān)鍵詞】：雞源大腸桿菌 人源大腸桿菌 耐藥基因 同源性 傳遞規(guī)律
【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：S852.61;R378.21
【目錄】：

• 摘要3-5
• Abstract5-10
• 前言10-11
• 第一篇 文獻(xiàn)綜述11-20
• 第一章 大腸桿菌及其耐藥性概述11-14
• 1.1 動(dòng)物源性大腸桿菌概述11
• 1.2 大腸桿菌耐藥性發(fā)展歷史和研究現(xiàn)狀11-12
• 1.3 大腸桿菌耐藥基因研究現(xiàn)狀12-14
• 第二章 大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生與互傳機(jī)制研究14-20
• 2.1 大腸桿菌耐藥性產(chǎn)生機(jī)制14-15
• 2.2 大腸桿菌對不同抗菌藥物的耐藥機(jī)制15-16
• 2.3 大腸桿菌耐藥性傳播機(jī)制16-20
• 第二篇 研究內(nèi)容20-63
• 第一章 雞源大腸桿菌耐藥性跟蹤檢測20-29
• 1.1 材料與方法20-22
• 1.2 結(jié)果與分析22-27
• 1.3 討論27-28
• 1.4 小結(jié)28-29
• 第二章 雞源與人源大腸桿菌耐藥基因檢測及同源性分析29-47
• 2.1 材料與方法29-34
• 2.2 結(jié)果分析34-44
• 2.3 討論44-45
• 2.4 小結(jié)45-47
• 第三章 不同來源大腸桿菌耐藥菌株的同源性與耐藥性比較分析47-53
• 3.1 材料與方法47-49
• 3.2 結(jié)果與分析49-51
• 3.3 討論51-52
• 3.4 小結(jié)52-53
• 第四章 攜帶耐藥基因大腸桿菌的轉(zhuǎn)接試驗(yàn)53-63
• 4.1 材料與方法53-55
• 4.2 結(jié)果與分析55-61
• 4.3 討論61-62
• 4.4 小結(jié)62-63
• 結(jié)論63-64
• 參考文獻(xiàn)64-71
• 作者簡介71-72
• 致謝72

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：774173