本文關(guān)鍵詞：小鼠海馬CA1和CA3神經(jīng)元基本電生理特性的比較分析

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【摘要】：目的 在急性小鼠海馬腦片上，應(yīng)用紅外微分干涉相差技術(shù)結(jié)合電荷耦合成像系統(tǒng)和腦片膜片鉗技術(shù)，觀察并分析海馬CA1與CA3神經(jīng)元的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和電生理特性。通過(guò)比較分析CA1和CA3神經(jīng)元基本電生理特性，為記憶和神經(jīng)疾病等研究提供一定的理論基礎(chǔ)。 方法 1制備小鼠海馬腦片取約14天的小鼠，體重20~40g，清潔級(jí)，用1%的戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉。麻醉昏迷后迅速移除大腦，固定頭部用手術(shù)剪刀分別沿著顱骨中線和顱底兩側(cè)方向剪開(kāi)頭顱骨，同時(shí)不斷地用約0C解剖液沖洗大腦（解剖液預(yù)先充含95%O2+5%CO2的混合氣體30min），然后把整個(gè)大腦置于有約0C解剖液的圓盤(pán)中，用手術(shù)刀和彎鑷子剔除嗅球、小腦，沿顱中線分開(kāi)兩大腦半球并除去海馬周?chē)踪|(zhì)和灰質(zhì)，修整腦塊后在底座上點(diǎn)少量α-氰基丙烯酸乙酯膠水以便海馬組織牢固站立，迅速將底座放在盛有約0C解剖液的切片機(jī)槽里并不斷充以混合氣體，沿矢狀位切成400m厚的腦片，，把腦片放在盛有人工腦脊液（artificial cerebrospinal fluid, ACSF，預(yù)先充混合氣體30min）的玻璃杯中室溫下孵育1~2h后備用。 2固定及灌流腦片腦片用以蓋網(wǎng)輕輕防止其移動(dòng)，蓋網(wǎng)是用鉑金絲制的U型框架周?chē)@以尼龍線繩并膠粘固定。腦片浸泡在ACSF浸泡在液面下約2mm，用蠕動(dòng)泵向腦片恒速灌流混合氣體飽和的ACSF，流速約1~2ml/min。 3神經(jīng)元形態(tài)學(xué)觀察應(yīng)用日本產(chǎn)的紅外顯微鏡結(jié)合電荷耦合攝像系統(tǒng)觀察海馬腦片CA1與CA3神經(jīng)元結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。 4電生理記錄鉗制電位在-60mV的電壓鉗模式下，記錄神經(jīng)元自發(fā)突觸后放電電流，以及給予步階脈沖刺激記錄不同離子通道電流；在電流鉗模式下，記錄海馬神經(jīng)元的靜息膜電位值和動(dòng)作電位特性的變化。所有細(xì)胞生物電信號(hào)通過(guò)膜片鉗放大器放大后輸出，應(yīng)用IGOR軟件分析作圖。 結(jié)果 海馬CA1和CA3神經(jīng)元立體結(jié)構(gòu)清晰，胞體突起明顯，細(xì)胞死亡少且容易封接。海馬CA1和CA3神經(jīng)元自發(fā)突觸后電流和動(dòng)作電位的幅度、頻率，二者之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；靜息膜電位和動(dòng)作電位峰峰間距，二者之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；去極化脈沖電壓與鈉和鉀離子通道電流密度，步階脈沖電流與動(dòng)作電位發(fā)放頻率在CA1與CA3神經(jīng)元之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，基因測(cè)序顯示CA1與CA3神經(jīng)元部分基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 0.05）。 結(jié)論 1海馬CA1和CA3神經(jīng)元自發(fā)突觸后電流和動(dòng)作電位的幅度、頻率，靜息膜電位和峰峰間距，二者之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2去極化脈沖電壓與鈉和鉀離子通道電流密度，步階脈沖電流與動(dòng)作電位發(fā)放頻率，二者之間差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 3.基因測(cè)序顯示CA1與CA3神經(jīng)元部分基因表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
【關(guān)鍵詞】：膜片鉗技術(shù) 小鼠 腦片 海馬神經(jīng)元 電生理
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：Q424
【目錄】：

• 英文縮略詞表5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-11
• 1 前言11-13
• 2 材料與方法13-20
• 3 結(jié)果20-33
• 4 討論33-38
• 5 結(jié)論38-39
• 6 參考文獻(xiàn)39-45
• 附錄45-46
• 致謝46-47
• 綜述47-54
• 參考文獻(xiàn)53-54

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：744443