本文關鍵詞：慢病毒介導uPA-siRNA重組表達載體的構建及促進兔軟骨細胞增殖

  更多相關文章： siRNA RNA干擾 慢病毒載體 軟骨細胞 增殖

【摘要】：目的構建篩選出靶向特異uPA-siRNA慢病毒表達載體,感染軟骨細胞后觀察其對軟骨細胞增殖及代謝的影響。方法根據(jù)siRNA原理設計、構建4對靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR篩選出高效靶向的P2序列。各序列經(jīng)慢病毒包裝后,通過Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染入兔軟骨細胞后,用RT-PCR和Western blot法分別檢測uPA-siRNA對細胞內(nèi)uPA mRNA和蛋白表達水平的抑制效果,用CCK-8法檢測uPA-siRNA對軟骨細胞增殖的影響。結(jié)果成功構建4對uPA-siRNA序列并篩選出用于后續(xù)實驗的高效靶向P2序列,各序列經(jīng)慢病毒載體包裝并成功轉(zhuǎn)染到原代軟骨細胞中,在感染復數(shù)(MOI)為100時感染率達到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制軟骨細胞中uPA基因及蛋白的表達,但P2沉默效果最好,基因抑制率達到70%,感染后軟骨細胞的增殖受到促進。結(jié)論成功構建高效靶向uPA-siRNA慢病毒載體,證實其可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染軟骨細胞并高效抑制uPA基因表達并促進軟骨細胞增殖。
【作者單位】： 華中科技大學同濟醫(yī)學院附屬同濟醫(yī)院骨科;新疆石河子大學醫(yī)學院附屬醫(yī)院骨科;
【關鍵詞】： siRNA RNA干擾 慢病毒載體 軟骨細胞 增殖
【基金】：國家自然科學基金(30960387,81260453) 兵團醫(yī)藥衛(wèi)生重點攻關項目(2013BA020) 兵團國際交流合作項目(2011BC004)
【分類號】：R346
【正文快照】： 尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogen activator,uPA)是絲氨酸蛋白水解酶家族的主要成員,其與uPA受體(urokinase-typeplasminogen activator receptors,uPAR)形成復合物作用于生理、病理條件下的細胞遷移、組織修復、介導細胞外基質(zhì)蛋白的水解、裂解膠原蛋白酶

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 任振華;王佳茵;王淑艷;張穎;鄒春林;張愚;;慢病毒介導GDNF基因?qū)κ承泛锕撬栝g充質(zhì)干細胞生物學特性的影響[J];基礎醫(yī)學與臨床;2012年05期

2 程曉剛;葉琬;張紹蘭;陳瑋;金虹;徐艷;李晉川;;SiRNA沉默JAB1表達抑制肝癌細胞增殖[J];基礎醫(yī)學與臨床;2012年11期

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 史晨輝;王維山;李長俊;張振東;郭風勁;陳安民;;uPA-siRNA重組慢病毒載體感染兔軟骨細胞對uPA和MMP-3表達的影響[J];重慶醫(yī)學;2014年15期

2 邢譯文;白靜;范維寧;劉鑫;周林林;徐廣賢;;OPN siRNA慢病毒載體的構建及其對大腸癌細胞增殖的抑制作用[J];基礎醫(yī)學與臨床;2014年03期

3 陳靜;周園;鄭磊;王前;蔡貞;;慢病毒載體構建穩(wěn)定的maspin表達敲減食管癌細胞株[J];醫(yī)學研究生學報;2014年02期

4 顏世舉;靳雷;肖春;王鑫;孫聰;張開亮;裘秀春;馬保安;范清宇;;microRNA-15a模擬物對人關節(jié)軟骨細胞增殖與凋亡的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學進展;2013年27期

5 李會丹;李寧麗;;滑膜成纖維細胞介導RA關節(jié)損傷的免疫學機制[J];現(xiàn)代免疫學;2013年06期

6 趙璽;趙文;彭海洲;孫t，

本文編號：730446