本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)uPA-siRNA重組表達(dá)載體的構(gòu)建及促進(jìn)兔軟骨細(xì)胞增殖

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【摘要】：目的構(gòu)建篩選出靶向特異uPA-siRNA慢病毒表達(dá)載體,感染軟骨細(xì)胞后觀察其對(duì)軟骨細(xì)胞增殖及代謝的影響。方法根據(jù)siRNA原理設(shè)計(jì)、構(gòu)建4對(duì)靶向兔uPA siRNA序列(P1、P2、P3和P4),用RT-PCR篩選出高效靶向的P2序列。各序列經(jīng)慢病毒包裝后,通過(guò)Lipofectamine 2000轉(zhuǎn)染入兔軟骨細(xì)胞后,用RT-PCR和Western blot法分別檢測(cè)uPA-siRNA對(duì)細(xì)胞內(nèi)uPA mRNA和蛋白表達(dá)水平的抑制效果,用CCK-8法檢測(cè)uPA-siRNA對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果成功構(gòu)建4對(duì)uPA-siRNA序列并篩選出用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)的高效靶向P2序列,各序列經(jīng)慢病毒載體包裝并成功轉(zhuǎn)染到原代軟骨細(xì)胞中,在感染復(fù)數(shù)(MOI)為100時(shí)感染率達(dá)到85%以上。P1、P2、P3和P4均可抑制軟骨細(xì)胞中uPA基因及蛋白的表達(dá),但P2沉默效果最好,基因抑制率達(dá)到70%,感染后軟骨細(xì)胞的增殖受到促進(jìn)。結(jié)論成功構(gòu)建高效靶向uPA-siRNA慢病毒載體,證實(shí)其可穩(wěn)定轉(zhuǎn)染軟骨細(xì)胞并高效抑制uPA基因表達(dá)并促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院骨科;新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院骨科;
【關(guān)鍵詞】： siRNA RNA干擾 慢病毒載體 軟骨細(xì)胞 增殖
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30960387,81260453) 兵團(tuán)醫(yī)藥衛(wèi)生重點(diǎn)攻關(guān)項(xiàng)目(2013BA020) 兵團(tuán)國(guó)際交流合作項(xiàng)目(2011BC004)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 尿激酶型纖溶酶原激活物(urokinase-typeplasminogen activator,uPA)是絲氨酸蛋白水解酶家族的主要成員,其與uPA受體(urokinase-typeplasminogen activator receptors,uPAR)形成復(fù)合物作用于生理、病理?xiàng)l件下的細(xì)胞遷移、組織修復(fù)、介導(dǎo)細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的水解、裂解膠原蛋白酶

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 任振華;王佳茵;王淑艷;張穎;鄒春林;張愚;;慢病毒介導(dǎo)GDNF基因?qū)κ承泛锕撬栝g充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年05期

2 程曉剛;葉琬;張紹蘭;陳瑋;金虹;徐艷;李晉川;;SiRNA沉默JAB1表達(dá)抑制肝癌細(xì)胞增殖[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2012年11期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 史晨輝;王維山;李長(zhǎng)俊;張振東;郭風(fēng)勁;陳安民;;uPA-siRNA重組慢病毒載體感染兔軟骨細(xì)胞對(duì)uPA和MMP-3表達(dá)的影響[J];重慶醫(yī)學(xué);2014年15期

2 邢譯文;白靜;范維寧;劉鑫;周林林;徐廣賢;;OPN siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)大腸癌細(xì)胞增殖的抑制作用[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年03期

3 陳靜;周園;鄭磊;王前;蔡貞;;慢病毒載體構(gòu)建穩(wěn)定的maspin表達(dá)敲減食管癌細(xì)胞株[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2014年02期

4 顏世舉;靳雷;肖春;王鑫;孫聰;張開亮;裘秀春;馬保安;范清宇;;microRNA-15a模擬物對(duì)人關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖與凋亡的影響[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2013年27期

5 李會(huì)丹;李寧麗;;滑膜成纖維細(xì)胞介導(dǎo)RA關(guān)節(jié)損傷的免疫學(xué)機(jī)制[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2013年06期

6 趙璽;趙文;彭海洲;孫t，

本文編號(hào)：730446