本文關(guān)鍵詞：單純皰疹病毒Ⅱ型ICP22真核表達(dá)載體的構(gòu)建及其對Vero細(xì)胞活性的影響

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【摘要】：目的構(gòu)建單純皰疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染細(xì)胞蛋白22(ICP22)真核表達(dá)載體p EGFP-C2/ICP22并研究其對非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero)細(xì)胞活性的影響。方法經(jīng)雙酶切實驗和測序驗證,以Xfect為介導(dǎo)將構(gòu)建的真核表達(dá)載體p EGFP-ICP22轉(zhuǎn)染至Vero細(xì)胞,并通過反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和綠色熒光檢驗其在細(xì)胞中的表達(dá),最后以MTT法檢測細(xì)胞活性。結(jié)果 48 h后觀察,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒組細(xì)胞經(jīng)RT-PCR驗證有目的基因的轉(zhuǎn)錄,并通過熒光顯微鏡觀察到融合蛋白表達(dá)。而空白質(zhì)粒組只檢測到熒光蛋白但未檢測到目的基因轉(zhuǎn)錄本,且對照組未檢測到熒光蛋白表達(dá)。轉(zhuǎn)染重組質(zhì)粒的細(xì)胞相對活性值為(82.39±6.44)%。結(jié)論成功構(gòu)建了p EGFP-ICP22真核表達(dá)載體,實現(xiàn)了其在Vero中的表達(dá),融合蛋白GFP-ICP22明顯降低了細(xì)胞活性。為進(jìn)一步探討HSV-ⅡICP22的功能和HSV-Ⅱ潛伏復(fù)發(fā)機(jī)制奠定了實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 黃河科技學(xué)院醫(yī)學(xué)院實驗中心;
【關(guān)鍵詞】： 真核表達(dá)載體 感染細(xì)胞蛋白 單純皰疹病毒Ⅱ型
【分類號】：R3416
【正文快照】： HSV屬于皰疹病毒科α亞科,是人類最為常見的病毒性疾病病原體之一,有HSV-1和HSV-2兩種血清型,兩型核酸序列同源性高達(dá)70%,但感染方式與臨床表現(xiàn)卻有較大差異[1],且HSV-2感染較HSV-1感染更為普遍。近年來研究表明HSV-2感染可顯著增加人類免疫缺陷病毒感染率,并與宮頸癌的發(fā)生有

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本文編號：728796