本文關(guān)鍵詞：單層培養(yǎng)細(xì)胞總RNA兩種提取方法的比較

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【摘要】：目的探討單層培養(yǎng)細(xì)胞總RNA提取過程中先行細(xì)胞消化或離心富集對(duì)所提RNA質(zhì)量是否產(chǎn)生影響。方法培養(yǎng)NGF誘導(dǎo)的PC12細(xì)胞,采用Trizol試劑提取RNA:離心組(A)先將貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞經(jīng)胰酶消化、離心獲得細(xì)胞沉淀,加入1 ml Trizol進(jìn)行RNA提取;直接組(B)將培養(yǎng)液棄盡后直接加入Trizol試劑(1 ml/10 cm2瓶壁)進(jìn)行RNA提取;均采用瓊脂糖凝膠電泳分析RNA完整性,紫外分光光度儀測(cè)定RNA濃度和OD260/OD280比值。結(jié)果凝膠電泳結(jié)果顯示,直接組出現(xiàn)3條清晰的條帶(28S、18S和5S條帶),離心組在電泳末端5S區(qū)出現(xiàn)粗大的條帶。兩組OD260/OD28比值相似,約為1.6。直接組組間樣品間RNA濃度相差較大。結(jié)論采用離心法和直接法提取貼壁細(xì)胞總RNA,先行細(xì)胞離心富集增加了RNA降解機(jī)會(huì),直接法提取的RNA質(zhì)量較高,考慮對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響,直接法更優(yōu)于離心法。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院心血管外科;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 單層培養(yǎng)細(xì)胞 RNA提取 離心法 直接法
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助(81172620)
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 0引言體外培養(yǎng)細(xì)胞的總RNA提取是開展多項(xiàng)現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)中的一項(xiàng)基本操作[1]。單層培養(yǎng)細(xì)胞總RNA提取過程中的首要步驟存在兩種截然不同的操作方式:一種是先將細(xì)胞消化離心富集后再進(jìn)行細(xì)胞裂解提取,僅需少量裂解液[2-3];另一種是將裂解液直接作用于貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞,但試劑

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8 蘇楊;LMW RNA分離方法改進(jìn)及與人類胚胎發(fā)育相關(guān)miRNA的克隆表達(dá)[D];暨南大學(xué);2007年

9 丁月芹;五種鼠基因組中4.5S RNA基因拷貝數(shù)的鑒定與分析[D];曲阜師范大學(xué);2011年

10 劉中成;棗總RNA提取及mRNA差異顯示技術(shù)體系的建立[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2005年

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本文編號(hào)：717748