發(fā)布時間：2017-08-19 22:10

  本文關(guān)鍵詞：肺炎鏈球菌候選疫苗蛋白SPD0295的重組表達(dá)及免疫活性分析

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【摘要】：目的評價磷酸烯醇丙酮酸依賴的磷酸酶轉(zhuǎn)移系統(tǒng)(phosphotrans-ferase system,PTS)SPD0295蛋白作為候選疫苗的免疫活性,分析其在不同血清型肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)中的表達(dá)情況。方法以S.pn中D39血清型基因組DNA為模板擴(kuò)增spd0295基因序列,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)含6×His標(biāo)簽的SPD0295重組蛋白,經(jīng)Ni-NTA樹脂純化后獲得高純度的目的蛋白;序列比對分析不同血清型S.pn的spd0295基因保守性;SPD0295蛋白與Alum佐劑混合經(jīng)腹腔注射免疫Balb/c小鼠制備多抗,ELISA法檢測其抗體效價,Western blot技術(shù)分析抗體的特異性,同時分析該蛋白在7株常見肺炎鏈球菌中的表達(dá)水平。結(jié)果spd0295基因在7株不同血清型S.pn中與D39菌株基因序列一致性大于99%;重組蛋白SPD0295免疫小鼠后獲得高滴度、高特異性的多克隆抗體;Western blot技術(shù)驗(yàn)證了SPD0295蛋白在7株常見肺炎鏈球菌株中均有表達(dá);黏附抑制試驗(yàn)表明SPD0295蛋白及其抗血清均可抑制細(xì)菌的黏附效應(yīng)。結(jié)論 SPD0295蛋白免疫Balb/c小鼠可獲得的多克隆抗體具有良好的免疫活性,且在不同血清型S.pn菌株中均有表達(dá),保守性強(qiáng),是1個潛在的S.pn候選疫苗蛋白。
【作者單位】： 遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)科;重慶醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院臨床檢驗(yàn)診斷學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 肺炎鏈球菌 磷酸烯醇丙酮酸依賴的磷酸酶轉(zhuǎn)移系統(tǒng) SPD 保守性
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31070819)
【分類號】：R392.12
【正文快照】： 肺炎鏈球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pn)是引起細(xì)菌性肺炎、中耳炎、菌血癥及腦膜炎等的主要致病菌,其在世界范圍內(nèi)有較高的致病率與死亡率,尤其是對嬰幼兒及老年人存在高致病性[1-2]。目前,市售的S.pn疫苗主要有2大類,一類是以23價S.pn疫苗為代表的多糖疫苗,存在免疫原性

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