本文關(guān)鍵詞：一次性生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)HEK293細(xì)胞生產(chǎn)Ad-IFNγ的工藝

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【摘要】：腺病毒載體是極具發(fā)展前景的基因治療載體之一,為獲得一條新型腺病毒規(guī)�；a(chǎn)工藝,研究采用5 L振蕩激流式一次性生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)HEK293細(xì)胞來生產(chǎn)重組腺病毒載體。細(xì)胞經(jīng)種子鏈逐步擴(kuò)增后,接種至AP10生物反應(yīng)器,采用CD293無血清培養(yǎng)基流加培養(yǎng)懸浮HEK293細(xì)胞,細(xì)胞密度達(dá)約2.0×106個/m L時,以30 MOI(Multiplicity of infection)感染重組Ad-IFNγ(Recombinant adenovirus-interferon gamma),48 h后收獲細(xì)胞,3次凍融裂解離心收獲上清病毒粗產(chǎn)品。采用殼蛋白免疫法快速測定粗產(chǎn)品滴度。結(jié)果表明,采用振蕩激流式一次性生物反應(yīng)器,流加HEK293細(xì)胞懸浮培養(yǎng)6 d,密度可達(dá)2.0×106個/m L,Ad-IFNγ粗產(chǎn)量達(dá)1.49×1013 IFU(Infectious unit),單細(xì)胞包裝量達(dá)3 800 IFU/cell。采用陰離子交換層析法純化重組腺病毒,回收率35.9%。建立了利用5 L激流式一次性生物反應(yīng)器懸浮培養(yǎng)HEK293細(xì)胞生產(chǎn)重組腺病毒載體Ad-IFNγ的初步工藝。
【作者單位】： 中國科學(xué)院微生物研究所;中山大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院;廣東省腫瘤靶向治療新藥研發(fā)企業(yè)重點實驗室;廣東省發(fā)展和改革委員會基因藥物工程實驗室;廣州達(dá)博生物制品有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 重組腺病毒 HEK細(xì)胞懸浮培養(yǎng) 一次性生物反應(yīng)器 分離純化 陰離子交換層析
【基金】：廣東省科技計劃項目(No.2011A080502010) 十二五重大新藥創(chuàng)制項目(No.2012ZX09401015)資助~~
【分類號】：R3416
【正文快照】： 腺病毒載體是極具發(fā)展?jié)摿Φ幕蛑委熭d體之一[1],在全球已報道1 970例基因治療臨床試驗中占23.5%[2]。探索規(guī)�；�、高效和可重復(fù)的符合GMP標(biāo)準(zhǔn)的重組腺病毒生產(chǎn)工藝,是臨床試驗和商業(yè)生產(chǎn)的迫切需求[3-5]。HEK293是最常用的腺病毒包裝細(xì)胞系,傳統(tǒng)采用微載體、紙片載體、固定

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本文編號：696173