本文關(guān)鍵詞：自身免疫性甲狀腺疾病動物模型的建立及抗炎治療的研究

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【摘要】：目的建立自身免疫甲狀腺疾病(AITD)中Graves病(GD)和甲狀腺相關(guān)性眼病(TAO)的動物模型,以IL-6/STAT1、STAT3為靶點(diǎn)研究木犀草素對小鼠自身免疫性甲狀腺炎(EAT)的抗炎作用。方法第一部分：20只8周齡雌性BALB/c小鼠共分為3組,造模組(T289組)10只,對照組(pcDNA3.1組)5只和空白組(Control組)5只。使用過表達(dá)TSHR A亞單位的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-TSHR289對T289組和pcDNA3.1組小鼠進(jìn)行基因免疫,免疫后立即給予電穿孔法進(jìn)行體內(nèi)轉(zhuǎn)染,每3周1次,共免疫4次,末次免疫后第1周使用7.0T微型MRI儀檢測免疫組和空白組小鼠眼球及眼外肌的變化,末次免疫后第2周處死小鼠。ELISA法檢測小鼠血清總T4、TRAb抗體水平,甲狀腺和眼部組織病理切片行HE染色、免疫組化和阿辛藍(lán)染色。第二部分：將30只8周齡雌性C57BL/6小鼠分為4組,分別為造模組(TG組)10只、木犀草素(Luteolin組)組10只、地塞米松組(陽性對照組,DEX組)和空白組(Control組)各5只。將100μg的豬甲狀腺球蛋白(pTG)(濃度1mg/ml)和100μl的弗氏完全佐劑完全乳化之后,給予TG組、Luteolin組和DEX組小鼠皮下注射(100μg/只)。第14天,再使用同樣劑量的pTG和弗氏不完全佐劑乳化,給予以上組小鼠第二次皮下注射。從末次注射后第1天開始,每天分別給予木犀草素組和地塞米松組小鼠腹腔注射相應(yīng)的藥物,木犀草素劑量為10mg/kg/day,地塞米松劑量為5mg/kg/day,空白組給予PBS。用藥7天后,在第21天處死小鼠。ELISA法檢測小鼠血清總T4、TGAb抗體水平,甲狀腺切片行HE染色。同時建立Raw264.7細(xì)胞炎癥模型：將體外培養(yǎng)的Raw264.7細(xì)胞接種到6孔板, 加入IFN-γ(10ng/ml)培養(yǎng)過夜。第二天加入木犀草素(20μmol/l)處理6h。注意設(shè)置對照組及空白組。提取細(xì)胞內(nèi)總蛋白,行western blot檢測細(xì)胞內(nèi)的STAT1、STAT3、環(huán)氧合酶2(COX2)的蛋白水平。結(jié)果第一部分：約80%的造模小鼠出現(xiàn)了甲狀腺功能亢進(jìn)的表現(xiàn),包括甲狀腺腫、病理學(xué)上甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞明顯的肥大和增生及輕微的甲狀腺炎、血清中T4水平和TRAb水平的顯著上升。同時也觀察到造模小鼠眼裂增寬(約30%)、MRI顯示眼外肌體積增大、眼外肌中T淋巴細(xì)胞的浸潤(約50%)及透明質(zhì)酸的聚集(約30%),均符合人類Graves甲亢與眼病的表現(xiàn),成功構(gòu)建了GD與TAO的小鼠模型。第二部分：成功構(gòu)建了EAT模型,40%左右的造模組小鼠均有甲狀腺不同程度的腫大。50%左右造模組小鼠的甲狀腺HE染色出現(xiàn)單核細(xì)胞的浸潤,Luteolin組、DEX組(陽性對照)和Control組小鼠無單核細(xì)胞的浸潤。甲狀腺免疫組化結(jié)果顯示木犀草素顯著減少甲狀腺內(nèi)STAT1與STAT3的表達(dá)。Raw264.7巨噬細(xì)胞模型中,木犀草素明顯抑制IFN-y誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)COX2、磷酸化STAT3(Y705位點(diǎn))和磷酸化STAT1(Y701位點(diǎn))的升高,而總STAT3和STAT1保持不變。結(jié)論本實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了Graves甲亢和TAO小鼠模型,為Graves病發(fā)病機(jī)制與新型藥物的研究提供了一個很好的工具。木犀草素抑制了EAT早期甲狀腺內(nèi)單核細(xì)胞的浸潤,減輕甲狀腺上皮細(xì)胞的破壞,為HT的早期干預(yù)藥物的研究提供了新的思路。
【關(guān)鍵詞】：AITD Graves病 甲狀腺相關(guān)性眼病 IL-6 木犀草素
【學(xué)位授予單位】：南京大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R581;R-332
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 縮略詞表10-11
• 第一章 綜述：AITD發(fā)病機(jī)制的最新進(jìn)展11-30
• 引言11
• 1 遺傳因素11-12
• 2 環(huán)境因素12-13
• 3 自身免疫機(jī)制13-17
• 4 甲狀腺相關(guān)性眼病(TAO)17-20
• 5 結(jié)論20
• 參考文獻(xiàn)20-30
• 第二章 Graves病及Graves眼病動物模型的建立30-54
• 引言30-31
• 1 實(shí)驗(yàn)材料31-33
• 2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟33-41
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果41-49
• 4 討論與結(jié)論49-51
• 參考文獻(xiàn)51-54
• 第三章：木犀草素對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性甲狀腺炎抗炎療效的研究54-72
• 引言54-55
• 1 材料與儀器55-56
• 2 實(shí)驗(yàn)方法與步驟56-58
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果58-64
• 4 討論64-66
• 5 結(jié)論66
• 參考文獻(xiàn)66-72
• 致謝72-73
• 碩士期間發(fā)表的文章73-74
• 附錄74-77

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳華新;于少碩;周維明;張意;;shRNA靜默CD4~+ T細(xì)胞AHNAK1基因?qū)π∈蠹谞钕傧嚓P(guān)性眼病進(jìn)程的抑制作用[J];國際眼科雜志;2014年02期

2 Aruna Dharmasena;;Selenium supplementation in thyroid associated ophthalmopathy: an update[J];International Journal of Ophthalmology(English Edition);2014年02期

3 趙靈芳;宋榮華;張進(jìn)安;;硒劑治療自身免疫性甲狀腺病的研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(醫(yī)學(xué)地理分冊);2014年02期

4 代佳靈;何為民;;眼眶成纖維細(xì)胞與甲狀腺相關(guān)眼病研究進(jìn)展[J];國際眼科雜志;2015年06期

5 曾程程;魏銳利;牟旆;王秋紅;;紅細(xì)胞分布寬度與甲狀腺相關(guān)性眼病相關(guān)[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2015年06期

6 胡敬峰;王遠(yuǎn)紅;李帥;高群;呂志華;;仿刺參糖胺聚糖對小鼠腹腔巨噬細(xì)胞功能的影響[J];中國海洋藥物;2014年06期

7 魏靜;田建卿;陳江輝;沈云玲;何小華;;左甲狀腺素鈉與夏枯草膠囊對橋本甲狀腺炎的臨床療效[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)與臨床;2014年24期

8 Jijie Chai;Yigong Shi;;Apoptosome and inflammasome: conserved machineries for caspase activation[J];National Science Review;2014年01期

9 于楠;高瑩;;自身免疫性甲狀腺炎免疫調(diào)節(jié)藥物的應(yīng)用[J];藥品評價;2014年03期

10 Veli Yaz?s?z;;Similarities and differences between Beh，

本文編號：695194