本文關(guān)鍵詞：miR-638慢病毒載體的構(gòu)建及其對(duì)MAPK14的靶向調(diào)控作用

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【摘要】：目的構(gòu)建miR-638慢病毒過(guò)表達(dá)載體,探討其對(duì)MAPK14基因的靶向調(diào)控作用。方法分別構(gòu)建pSicoR-miR-638及pMIR-Report-MAPK14過(guò)表達(dá)載體,應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因活性、Western blot及實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qRT-PCR)法驗(yàn)證miR-638與MAPK14的靶向調(diào)控關(guān)系。結(jié)果經(jīng)PCR、酶切及測(cè)序結(jié)果證明成功構(gòu)建了pSicoR-miR-638及pMIR-ReportMAPK14重組質(zhì)粒,并通過(guò)實(shí)驗(yàn)證實(shí)miR-638過(guò)表達(dá)明能顯抑制MAPK14的蛋白及mRNA表達(dá)(P0.05);抑制miR-638的表達(dá),則MAPK14蛋白及mRNA的表達(dá)水平明顯上調(diào)(P0.05)。結(jié)論成功構(gòu)建pSicoR-miR-638慢病毒載體,并證實(shí)其可通過(guò)靶向作用于MAPK14-3’UTR的特異序列而直接抑制MAPK14基因的表達(dá)。
【作者單位】： 寧夏醫(yī)科大學(xué)檢驗(yàn)學(xué)院;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心;
【關(guān)鍵詞】： microRNA miR- MAPK
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31160494) 教育部“新世紀(jì)優(yōu)秀人才支持計(jì)劃”項(xiàng)目(NCET11-11023) 中國(guó)博士后特別基金項(xiàng)目(2012T50834) 中國(guó)博士后基金項(xiàng)目(20110491554)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： microRNA(miRNA)是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一類長(zhǎng)約為18~25個(gè)核苷酸的內(nèi)源性非編碼單鏈小分子RNA,其表達(dá)具有高度的組織特異性、保守性和時(shí)序性;miRNA主要通過(guò)堿基互補(bǔ)匹配原則,結(jié)合mRNA的非編碼區(qū)導(dǎo)致靶mRNA降解,也可通過(guò)與靶mRNA3’UTR結(jié)合,阻遏基因轉(zhuǎn)錄后的翻譯過(guò)程[1],從而參與細(xì)胞

【相似文獻(xiàn)】

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2 葉禮紅;舒曉春;鄔偉民;魯紅云;孟曉軍;孫遼;;TIEG特異的siRNA慢病毒載體的構(gòu)建及鑒定[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2009年17期

3 左雨娜;焦德敏;于慧慧;張鑄業(yè);李宙陽(yáng);袁軍;劉愛(ài)和;王彥刈;;一種簡(jiǎn)單的慢病毒載體介導(dǎo)的同時(shí)沉默雙基因的方法[J];中國(guó)現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志;2010年03期

4 劉燕;彭聿平;黃彥;黃慧偉;邱一華;;miR-TH克隆及慢病毒載體的構(gòu)建[J];南通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2010年06期

5 黃芳;王毅剛;蔡榮;楊光華;錢程;;可誘導(dǎo)慢病毒載體的優(yōu)化策略及應(yīng)用[J];細(xì)胞生物學(xué)雜志;2007年06期

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7 周軍智;鄒永康;李建國(guó);劉楠喬;蔡亞非;王根林;;含PGK啟動(dòng)子慢病毒表達(dá)質(zhì)粒的構(gòu)建與鑒定[J];安徽師范大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2009年02期

8 韓騰龍;王立峰;張t，

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