發(fā)布時(shí)間：2017-08-17 08:13

  本文關(guān)鍵詞：胞紅蛋白在氧化低密度脂蛋白誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞損傷中的作用及機(jī)制

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【摘要】：[目的]胞紅蛋白(cytoglobin,CYGB)是一種具有抗氧化應(yīng)激作用的珠蛋白,研究顯示CYGB能夠通過抗氧化應(yīng)激來達(dá)到細(xì)胞保護(hù)作用。本文旨在探討人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human Umbilical Vein Endothelial Cells,HUVECs)在氧化損傷過程中CYGB的表達(dá);構(gòu)建CYGB表達(dá)/干擾質(zhì)粒HUVECs模型,研究CYGB在氧化應(yīng)激過程中對HUVECs的保護(hù)作用并探討可能的機(jī)制。[方法]1、培養(yǎng)HUVECs,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。2、實(shí)驗(yàn)分為4組:對照組,25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL、200μg/ml oxLDL處理組;Western blot檢測HUVECs在不同濃度oxLDL刺激24h后,細(xì)胞內(nèi)CYGB蛋白的表達(dá)水平;Western blot檢測HUVECs在100μg/ml oxLDL刺激不同時(shí)間(4、8、12、24h)后,細(xì)胞內(nèi)CYGB蛋白的表達(dá)水平。3、將HUVECs分為4組:對照組、100μg/ml oxLDL組、100μg/ml oxLDL+CYGB組及100μg/ml oxLDL+CYGB sh RNA組,然后觀察在氧化應(yīng)激時(shí)CYGB對HUVECs的作用。于24h后,檢測CYGB蛋白水平、谷胱甘肽過氧化物酶(Glutathione Peroxidase,GSH-PX)、超氧化物歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)、乳酸脫氫酶(Lactic Dehydrogenase,LDH)的活性以及丙二醛(Malondialdehyde,MDA)的含量,以及Bcl2和Bax的蛋白水平;4、將HUVECs分為3組:對照組、100μg/ml oxLDL組、100μg/ml oxLDL+Staurosporine(PKC抑制劑)組。觀察PKC抑制劑在oxLDL誘導(dǎo)HUVECs損傷中的作用。檢測CYGB蛋白水平、GSH-PX、SOD、LDH、MDA、Bcl2和Bax的蛋白水平。[結(jié)果]1、倒置顯微鏡下顯示,正常HUVECs呈現(xiàn)典型鋪路石狀態(tài)。2、Western blot結(jié)果顯示:0,25μg/ml oxLDL、50μg/ml oxLDL、100μg/ml oxLDL處理HUVECs 24h后,CYGB表達(dá)水平高于對照組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05);100μg/ml oxLDL處理HUVECs 4、8、12、24h后,CYGB表達(dá)水平高于對照組,在24h組CYGB表達(dá)水平最高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3、轉(zhuǎn)染CYGB表達(dá)質(zhì)粒后HUVECs中CYGB的表達(dá)明顯增加;轉(zhuǎn)染CYGB干擾質(zhì)粒后HUVECs中CYGB的表達(dá)明顯降低。4、Western blot結(jié)果顯示:100μg/ml oxLDL組和100μg/ml oxLDL+CYGB組中CYGB蛋白表達(dá)水平均高于正常對照組,而100μg/ml oxLDL+CYGB shRNA組中CYGB蛋白表達(dá)水平則低于正常對照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。與100μg/ml oxLDL組相比,100μg/ml oxLDL+CYGB組中細(xì)胞SOD、GSH-PX活性顯著提高,Bcl2的表達(dá)也顯著增加(P0.05),LDH的活性和MDA的含量明顯降低,Bax的表達(dá)明顯降低(P0.05);與100μg/ml oxLDL組相比,100μg/ml oxLDL+CYGB sh RNA組中細(xì)胞SOD、GSH-PX活性顯著降低,Bcl2的表達(dá)降低(P0.05),LDH的活性和MDA的含量明顯升高,Bax的表達(dá)增加(P0.05)。5、Western blot結(jié)果顯示:與正常對照組相比,100μg/ml oxLDL組CYGB表達(dá)升高;而與100μg/ml oxLDL組相比,100μg/ml oxLDL+Staurosporine組中CYGB蛋白表達(dá)水平降低(P0.05);與100μg/ml oxLDL組相比,100μg/ml oxLDL+Staurosporine組中細(xì)胞SOD、GSH-PX明顯降低,Bcl2的表達(dá)也顯著降低(P0.05),LDH的活性和MDA的含量明顯升高,Bax的表達(dá)明顯增加(P0.05)。[結(jié)論]1、CYGB在oxLDL引起的內(nèi)皮細(xì)胞損傷中能發(fā)揮拮抗作用;2、CYGB發(fā)揮拮抗作用可能與PKC信號通路有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞 氧化應(yīng)激 胞紅蛋白 蛋白激酶C
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R363
【目錄】：

• 摘要4-7
• Abstract7-15
• 第1章 緒論15-19
• 1.1 引言15-17
• 1.2 技術(shù)路線17-19
• 1.2.1 HUVECs形態(tài)觀察17
• 1.2.2 構(gòu)建HUVECs的氧化損傷模型17
• 1.2.3 CYGB對oxLDL處理的HUVECs的保護(hù)作用17-18
• 1.2.4 CYGB對oxLDL處理的HUVECs保護(hù)作用的初步機(jī)制18-19
• 第2章 實(shí)驗(yàn)材料19-21
• 2.1 細(xì)胞株19
• 2.2 主要試劑19-20
• 2.3 主要儀器20
• 2.4 數(shù)據(jù)分析20-21
• 第3章 實(shí)驗(yàn)方法21-31
• 3.1 細(xì)胞培養(yǎng)21-22
• 3.1.1 細(xì)胞復(fù)蘇21
• 3.1.2 細(xì)胞傳代21
• 3.1.3 細(xì)胞凍存21-22
• 3.2 實(shí)驗(yàn)分組22-23
• 3.3 oxLDL處理HUVECs對CYGB表達(dá)的影響23-26
• 3.3.1 不同濃度的oxLDL處理HUVECs對CYGB表達(dá)的影響23-25
• 3.3.1.1 試劑配制23-24
• 3.3.1.2 蛋白提取24
• 3.3.1.3 蛋白定量24
• 3.3.1.4 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）24-25
• 3.3.2 oxLDL處理HUVECs不同時(shí)間對CYGB表達(dá)的影響25-26
• 3.4 CYGB表達(dá)/干擾HUVECs模型的構(gòu)建和鑒定26
• 3.5 GSH-PX活性測定26-28
• 3.5.1 試劑組成及配制26-27
• 3.5.2 樣本處理27
• 3.5.3 GSH-PX活性測定操作步驟27-28
• 3.6 SOD活性檢測28-29
• 3.6.1 試劑組成及配制28
• 3.6.2 樣本處理28
• 3.6.3 SOD活性檢測步驟28-29
• 3.7 LDH活性檢測29-30
• 3.7.1 試劑組成及配制29
• 3.7.2 樣本處理29
• 3.7.3 LDH活性檢測步驟29-30
• 3.8 MDA含量檢測30-31
• 3.8.1 試劑組成及配制30
• 3.8.2 樣品處理30
• 3.8.3 MDA含量檢測步驟30-31
• 第4章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-47
• 4.1 細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察結(jié)果31
• 4.2 oxLDL處理HUVECs對CYGB表達(dá)的影響31-33
• 4.2.1 不同濃度oxLDL處理HUVECs對CYGB表達(dá)的影響31-32
• 4.2.2 oxLDL處理HUVECs不同時(shí)間對CYGB表達(dá)的影響32-33
• 4.3 CYGB對oxLDL處理的HUVECs的拮抗作用33-40
• 4.3.1 CYGB表達(dá)/干擾HUVECs的構(gòu)建和鑒定33-34
• 4.3.2 oxLDL處理HUVECs對CYGB蛋白表達(dá)的影響34-35
• 4.3.3 CYGB對oxLDL處理HUVECs時(shí)GSH-PX、SOD、LDH活性及MDA含量的影響35-38
• 4.3.4 CYGB對oxLDL處理HUVECs時(shí)Bcl2、Bax蛋白表達(dá)的影響38-40
• 4.4 PKC抑制劑對HUVECs CYGB蛋白表達(dá)的影響40-41
• 4.4.1 PKC抑制劑的抑制效果40
• 4.4.2 PKC抑制劑對oxLDL處理的HUVECs中CYGB蛋白表達(dá)的影響40-41
• 4.5 CYGB對oxLDL處理的HUVECs的拮抗作用的初步機(jī)制41-47
• 4.5.1 PKC抑制劑對oxLDL處理的HUVECs中SOD、GSH-PX、LDH活性及MDA含量的影響41-44
• 4.5.2 PKC抑制劑對oxLDL處理的HUVECs中Bcl2、Bax蛋白表達(dá)的影響44-47
• 第5章 討論47-51
• 第6章 結(jié)論51-53
• 參考文獻(xiàn)53-57
• 綜述 新型缺氧保護(hù)因子胞紅蛋白的研究進(jìn)展57-69
• 參考文獻(xiàn)64-69
• 攻讀學(xué)位期間的科研成果69-70
• 課題資助情況70-71
• 致謝71-72

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3 蔣光峰;張金慧;李薇;;阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者血清NO和oxLDL水平的變化及臨床意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2011年21期

4 荊清,秦永文,沈茜,張國元,吳宗貴;內(nèi)皮素A受體在oxLDL促血管平滑肌細(xì)胞增殖中的作用[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);1999年12期

5 劉欣;oxLDL與腸道細(xì)胞凋亡[J];國外醫(yī)學(xué)(消化系疾病分冊);2003年05期

6 王群山;抗-oxLDL抗體的檢測與動脈粥樣硬化[J];國外醫(yī)學(xué).心血管疾病分冊;2003年01期

7 曾瑩 ,趙高峰 ,錢軍 ,王宗立 ,佘銘鵬;oxLDL對轉(zhuǎn)人apoA1基因小鼠動脈平滑肌細(xì)胞膽固醇攝取和清除的影響(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年04期

8 董巍;陶劍虹;;冠心病心絞痛患者血清抗oxLDL抗體的測定水平[J];醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)與臨床;2006年05期

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1 Ding Yiling;Deng Yali;;The Expression of LOX-1、oxLDL in the peripheral blood in Pre-eclampsia[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國婦產(chǎn)科學(xué)術(shù)會議產(chǎn)科會場（產(chǎn)科學(xué)組、妊高癥學(xué)組）論文匯編[C];2012年

2 ;The Expression of Myosin Light Chain Kinase in oxLDL-treated HUVECs is Regulated by the Melatonin through the pathway of ERK/MAPK[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)會2009年學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2009年

3 李玫;吳宗貴;張國元;劉莉;曹陽;;oxLDL對單核細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞粘附的影響及其作用機(jī)制[A];第一屆全國中西醫(yī)結(jié)合心血管病中青年醫(yī)師論壇論文匯編[C];2008年

4 吳凡;屈伸;;oxLDL及炎性因子對ABCA1功能和表達(dá)的影響及相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制的探討[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會和第十五次學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

5 ;Effects of SOCS1 on proliferation induced by oxLDL in vascular smooth muscle cells[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

6 ;MicroRNA profiling identifies miR-146a and miR-29a and their target genes CD40L and LPL in the regulation of oxLDL-treated dendritic cell maturation,inflammatory response and lipid uptake[A];第十三次全國心血管病學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

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9 Ke Yang;Xiao Qun Wang;Lin Lu;Qiu Jing Chen;Wei Feng Shen;;MiR-146a inhibits oxidized low-density lipoprotein-induced lipid accumulation and inflammatory response via targeting toll-like receptor 4[A];中華醫(yī)學(xué)會第十五次全國心血管病學(xué)大會論文匯編[C];2013年

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5 徐海珊;植物雌激素α-玉米赤霉醇對oxLDL誘導(dǎo)人血管內(nèi)皮細(xì)胞ET-1基因表達(dá)的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2005年

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9 陳婷;microRNA-155調(diào)控oxLDL刺激樹突細(xì)胞參與動脈粥樣硬化免疫炎癥反應(yīng)的作用及機(jī)制[D];浙江大學(xué);2013年

10 孟濤;oxLDL和其受體LOX-1誘導(dǎo)滋養(yǎng)細(xì)胞凋亡及與子癇前期發(fā)病關(guān)系的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

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1 王京;急性缺血性腦卒中患者尿酸、oxLDL與頸動脈粥樣硬化的相關(guān)性研究[D];承德醫(yī)學(xué)院;2016年

2 王賀林;GDF11抑制oxLDL引起的巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞泡沫化進(jìn)程及其機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2016年

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9 李媛彬;oxLDL干擾HUVECs的DSG1和DSC2表達(dá)并增加單層內(nèi)皮細(xì)胞對LDL的通透性[D];南華大學(xué);2010年

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本文編號：687948