本文關(guān)鍵詞：Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞成骨轉(zhuǎn)化中的作用機(jī)制

  更多相關(guān)文章： Klotho基因 脫氧核糖核酸甲基化 硫酸吲哚酚

【摘要】：目的從細(xì)胞層面探討Klotho基因超甲基化在硫酸吲哚酚(IS)誘導(dǎo)的血管平滑肌細(xì)胞成骨轉(zhuǎn)化中的作用和相關(guān)機(jī)制。方法體外培養(yǎng)人主動(dòng)脈血管平滑肌細(xì)胞(HASMC),以IS按0、200、500、1 000μmol/L的濃度梯度干預(yù)6 d,采用茜素紅染色觀察鈣鹽沉積,Real-time聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)和Western印跡檢測(cè)平滑肌細(xì)胞肌動(dòng)蛋白α(α-SMA)、smoothin、骨橋蛋白(OPN)、堿性磷酸酶(ALP)、核結(jié)合因子α1(Cbfα1)、Klotho和不同DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的m RNA和蛋白表達(dá)水平,同時(shí)利用焦磷酸測(cè)序方法檢測(cè)HASMC的Klotho基因甲基化率;在IS 1 000μmol/L組培養(yǎng)基中加入不同濃度梯度的5-氮雜脫氧胞苷(5Aza-2dc)進(jìn)行干預(yù),觀察茜素紅染色、各基因表達(dá)水平和Klotho基因甲基化率的改變。組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn),組間率的比較采用卡方檢驗(yàn)。結(jié)果IS 1 000μmol/L組HASMC細(xì)胞外基質(zhì)呈紅色,細(xì)胞結(jié)節(jié)處濃染,為鈣鹽沉積染色陽(yáng)性。IS可以下調(diào)HASMC的α-SMAm RNA和蛋白及smoothin表達(dá)水平,上調(diào)OPN、ALP的m RNA和蛋白表達(dá)水平,使HASMC逐漸喪失平滑肌細(xì)胞表型而發(fā)生成骨轉(zhuǎn)化。與對(duì)照組比較,IS 200、500、1 000μmol/L刺激6 d可顯著升高HASMC的Klotho基因甲基化率(9±1%與4±0.7%,t=5.38,P0.01;18±1.3與4±0.7%,t=6.92,P0.01;41±2%與4±0.7%,t=9.26,P0.001)。IS 500、1 000μmol/L可顯著下調(diào)HASMC的Klotho m RNA和蛋白表達(dá)水平。同時(shí)IS 1 000μmol/L可顯著上調(diào)HASMC的DNMT1 m RNA和蛋白表達(dá)水平。5Aza-2dc 10μmol/L干預(yù)可減輕IS誘導(dǎo)的細(xì)胞外鈣鹽沉積,上調(diào)α-SMA蛋白、smoothin表達(dá)水平并下調(diào)Cbfα1蛋白表達(dá)水平,同時(shí)減低HASMC的Klotho基因甲基化率(20±1%與41±2%,t=6.98,P0.01)、上調(diào)HASMC的Klotho蛋白表達(dá)水平。結(jié)論 IS可通過(guò)上調(diào)血管平滑肌細(xì)胞DNMT表達(dá),啟動(dòng)Klotho基因超甲基化,進(jìn)而下調(diào)Klotho基因轉(zhuǎn)錄和表達(dá),誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞成骨轉(zhuǎn)化。
【作者單位】： 復(fù)旦大學(xué)附屬中山醫(yī)院腎內(nèi)科 上海市腎病與透析研究所;
【關(guān)鍵詞】： Klotho基因 脫氧核糖核酸甲基化 硫酸吲哚酚
【基金】：國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI10B03) 上海市科學(xué)技術(shù)委員會(huì)基金(142R1406400) 上海市衛(wèi)計(jì)委青年醫(yī)師資助培養(yǎng)計(jì)劃
【分類號(hào)】：R3416
【正文快照】： 近年發(fā)現(xiàn)一些蛋白結(jié)合類中分子尿毒癥毒素與終末期腎病(end stage renal disease,ESRD)患者心血管疾病死亡率和總死亡率相關(guān),其中以硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate,IS)最受關(guān)注[1]。IS可通過(guò)誘導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞成骨細(xì)胞轉(zhuǎn)分化而促進(jìn)血管鈣化,但是IS誘導(dǎo)血管鈣化的具體機(jī)制目前尚

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 李峻嶺;姜盛花;段穎欣;韓英;;硫酸吲哚酚對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞鈣化影響的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華臨床醫(yī)師雜志(電子版);2013年18期

2 楊可;孫蕾;管旭;肖堂利;徐新麗;何婷;趙景宏;;硫酸吲哚酚誘導(dǎo)心肌細(xì)胞肥大的研究[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年24期

3 初啟江;;不同透析方法對(duì)硫酸吲哚酚清除效果及其透析后體內(nèi)變化研究[J];中國(guó)老年學(xué)雜志;2009年23期

4 吳淳;石成鋼;李梅;潘碧妍;邢小敏;馮志強(qiáng);謝智勇;;HPLC-FLU法測(cè)定人血清中硫酸吲哚酚濃度及其在血液透析病人中的應(yīng)用[J];中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2010年08期

5 ;毒物學(xué)(毒理學(xué))[J];國(guó)外科技資料目錄.醫(yī)藥衛(wèi)生;1998年03期

6 初啟江;許建立;;兩種透析方法對(duì)尿毒癥透析患者硫酸吲哚酚和甲狀旁腺素清除效果比較[J];中國(guó)血液凈化;2010年01期

7 ;[J];;年期

8 ;[J];;年期

9 ;[J];;年期

10 ;[J];;年期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 初啟江;陳香美;;透析療法對(duì)硫酸吲哚酚清除效果研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腎臟病學(xué)分會(huì)2006年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

2 王家琪;;腎毒素硫酸吲哚酚抑制抗原專一性Th1細(xì)胞功能及誘導(dǎo)免疫細(xì)胞氧化性傷害(英文)[A];2013第七屆海峽兩岸毒理學(xué)研討會(huì)大會(huì)手冊(cè)[C];2013年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

1 初啟江;硫酸吲哚酚水平與腎小球?yàn)V過(guò)率關(guān)系及不同治療對(duì)硫酸吲哚酚水平的影響[D];中國(guó)人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2006年

2 陳冰;miR-34a在硫酸吲哚酚介導(dǎo)心腎綜合征心功能損傷中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 蔣亞芬;腎衰狀態(tài)下硫酸吲哚酚血濃度改變及乳酸菌基因工程菌對(duì)其降解的研究[D];中南大學(xué);2012年

2 陳睿;多沙唑嗪對(duì)硫酸吲哚酚誘導(dǎo)的單核細(xì)胞趨化蛋白-1表達(dá)影響的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2010年

3 李慧茹;α-硫辛酸對(duì)硫酸吲哚酚致臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞氧化損傷的影響[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

4 姜盛花;硫酸吲哚酚對(duì)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞增生與鈣化影響機(jī)制的研究[D];延邊大學(xué);2012年

，

本文編號(hào)：661014