本文關(guān)鍵詞：空腸彎曲菌細(xì)胞致死性腫脹毒素單克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：【目的】原核表達(dá)空腸彎曲菌細(xì)胞致死性腫脹毒素B蛋白(CdtB),制備其單克隆抗體(mAb),并研究mAb抗毒性作用。【方法】擴(kuò)增空腸彎曲菌cdtB基因并將其構(gòu)建到pET-30a(+)和pGEX-6p-1表達(dá)載體,以原核表達(dá)的GST-CdtB蛋白為免疫原,應(yīng)用雜交瘤技術(shù)進(jìn)行細(xì)胞融合;采用間接ELISA方法測(cè)定細(xì)胞上清和mAb腹水效價(jià),Dot-ELISA、Western blot分析mAb特異性,并以CaCo-2和HD-11細(xì)胞為模型,鑒定mAb抗毒性能力�！窘Y(jié)果】成功構(gòu)建重組原核表達(dá)質(zhì)粒pET-30a(+)-cdtB和pGEX-6p-1-cdtB,并融合表達(dá)rHis-CdtB和rGST-CdtB蛋白。獲得5株穩(wěn)定分泌CdtB抗體的雜交瘤細(xì)胞株,分別命名為1F3,1F5,2E4,2E11,2F2。抗體Ig類和亞類檢測(cè)顯示2E11 Ig亞類為IgG2b,其他4株均為IgG1。抗體效價(jià)高達(dá)1:(1×108)。Dot-ELISA試驗(yàn)表明5株mAb均能與空腸彎曲菌標(biāo)準(zhǔn)株發(fā)生特異性反應(yīng),與非空腸彎曲菌呈陰性反應(yīng);Western blot法分析表明5株mAb均能與純化蛋白rGST-CdtB有良好的反應(yīng)性�；贑aCo-2細(xì)胞的黏附和侵襲實(shí)驗(yàn)表明mAb能顯著降低細(xì)菌的黏附和侵襲能力(P0.01)。【結(jié)論】成功制備了針對(duì)空腸彎曲菌CdtB蛋白的mAb。為進(jìn)一步研究空腸彎曲菌致病機(jī)制,以及為研制治療性類藥物奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 揚(yáng)州大學(xué)江蘇省人獸共患病學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 江蘇省動(dòng)物重要疫病與人獸共患病防控協(xié)同創(chuàng)新中心;
【關(guān)鍵詞】： CdtB蛋白 空腸彎曲菌 單克隆抗體
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31372449) 國(guó)家“863計(jì)劃”(2012AA101601) 國(guó)家科技支撐計(jì)劃(2014BAD13B02)~~
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni,Cj)是一類革蘭氏陰性、微需氧、可移動(dòng)的彎曲短桿菌,是引起人胃腸道感染最常見的人獸共患病原菌。某種血清型的空腸彎曲菌可引起周圍神經(jīng)自身免疫性格林-巴利綜合癥(Guillain-Barre syndrome,GBS)[1]�？漳c彎曲菌由于培養(yǎng)條件苛刻、抗原結(jié)構(gòu)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 黃金林;尹衍新;梅德霞;張弓;潘志明;劉秀梵;焦新安;;空腸彎曲菌FlaA單克隆抗體的制備與鑒定[J];微生物學(xué)報(bào);2010年08期

2 黃金林;尹衍新;胡元慶;張弓;劉秀梵;焦新安;;空腸彎曲菌cjaA基因表達(dá)蛋白單克隆抗體的制備及其生物學(xué)特性鑒定[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年11期

3 陸磊;焦新安;黃金林;;空腸彎曲菌細(xì)胞致死性腫脹毒素研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年10期

4 商宇偉;王楠;黃金林;焦新安;;空腸彎曲菌感染動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2013年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 錢衛(wèi)東;王婷;施春陽(yáng);;空腸彎曲菌毒力因子研究進(jìn)展[J];中國(guó)畜牧獸醫(yī);2011年04期

2 譚南;袁春雷;楊曉華;林愛心;;中山地區(qū)兒童空腸彎曲菌流行情況分析[J];當(dāng)代醫(yī)學(xué);2014年01期

3 商宇偉;王楠;黃金林;焦新安;;空腸彎曲菌感染動(dòng)物模型的研究進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)報(bào);2013年04期

4 任方哲;王楠;商宇偉;焦新安;黃金林;;空腸彎曲菌鞭毛研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2013年08期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 關(guān)瑞;腫瘤相關(guān)基因ZNF403的功能研究[D];中南大學(xué);2012年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前4條

1 黃書娟;雜色曲霉素對(duì)體外培養(yǎng)人支氣管上皮細(xì)胞（BEAS-2B）細(xì)胞周期影響的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

2 李小平;反式脂肪酸對(duì)人臍靜脈平滑肌細(xì)胞增殖及功能的影響[D];南昌大學(xué);2013年

3 朱佳琪;彎曲菌real-time PCR技術(shù)的建立及多種定量檢測(cè)方法的比較[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

4 劉小燕;14-3-3蛋白家族在卵巢子宮內(nèi)膜異位囊腫中的表達(dá)及意義[D];南昌大學(xué)醫(yī)學(xué)院;2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前8條

1 陽(yáng)成波,蔣原,祝長(zhǎng)青,黃克和,甘玉冬;空腸彎曲菌致病機(jī)理研究進(jìn)展[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2003年03期

2 徐婷婷;細(xì)胞致死性腫脹毒素及其研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(兒科學(xué)分冊(cè));2004年02期

3 黃金林;許海燕;焦新安;;空腸彎曲菌感染與人格林-巴利綜合征[J];疾病監(jiān)測(cè);2009年08期

4 劉懷軍,陳薇,劉瑞春,李春巖,李林芳,王勇;空腸彎曲菌感染后中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變動(dòng)物模型的初步研究[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2005年01期

5 徐飛;邢叢叢;陳揚(yáng);李震中;白欣立;;吉蘭-巴雷綜合征空腸彎曲菌感染誘導(dǎo)巴馬小型豬致周圍神經(jīng)病動(dòng)物模型的建立[J];腦與神經(jīng)疾病雜志;2012年02期

6 黃金林;許海燕;姜豐;尹衍新;張弓;潘志明;劉秀梵;焦新安;;空腸彎曲菌脈沖場(chǎng)凝膠電泳分子檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J];微生物學(xué)報(bào);2009年04期

7 李燁;史鋒;王小元;;空腸彎曲菌致病分子機(jī)制研究進(jìn)展[J];食品與生物技術(shù)學(xué)報(bào);2009年03期

8 陸磊;焦新安;黃金林;;空腸彎曲菌細(xì)胞致死性腫脹毒素研究進(jìn)展[J];中國(guó)人獸共患病學(xué)報(bào);2012年10期

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 張成全;牛γ干擾素和白細(xì)胞介素4基因的原核表達(dá)及其產(chǎn)物的單克隆抗體研制[D];揚(yáng)州大學(xué);2008年

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 孫自捷;余傳霖;段恕誠(chéng);;有關(guān)空腸彎曲菌的致病性研究[J];上海醫(yī)學(xué);1987年08期

2 張河戰(zhàn);對(duì)乳膠凝集試驗(yàn)確定彎曲菌方法的評(píng)價(jià)[J];國(guó)際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;1989年03期

3 Guerrant R L ,羅建輝;空腸彎曲菌細(xì)胞毒素研究[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1988年03期

4 陳晶晶,趙清慧;空腸彎曲菌對(duì)小鼠成纖維細(xì)胞L929的侵襲性及其抑制作用的研究[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1988年03期

5 劉定祥;空腸彎曲菌表面結(jié)構(gòu)的研究及意義[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;1988年01期

6 王婷;蔣原;唐泰山;張常印;祝常青;;空腸彎曲菌flaA基因的原核表達(dá)及抗原性鑒定[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2010年04期

7 ;空腸彎曲菌不耐熱腸毒素的檢測(cè)[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1988年04期

8 天兒和暢;張成武;;空腸彎曲菌的感染機(jī)制[J];江西醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1990年04期

9 余秀葵;范益華;黃子亮;林紅;吳潔;李威海;;汕頭市區(qū)空腸彎曲菌的電鏡觀察[J];微生物學(xué)雜志;1986年03期

10 張京海,張意仲,吳采菲,魏燕玲;空腸彎曲菌共同抗原的提取及應(yīng)用:SPA協(xié)同凝集試驗(yàn)快速檢測(cè)空腸彎曲菌的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)人獸共患病雜志;1988年04期

中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前9條

1 祝令偉;郭學(xué)軍;馮書章;;空腸彎曲菌蛋白質(zhì)組學(xué)研究概述[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)生物制品學(xué)分會(huì)中國(guó)微生物學(xué)會(huì)獸醫(yī)微生物學(xué)專業(yè)委員會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)（第三屆中國(guó)獸藥大會(huì)學(xué)術(shù)論壇）論文集[C];2010年

2 張弓;黃金林;焦新安;;空腸彎曲菌“活的非可培養(yǎng)狀態(tài)”研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2009年

3 薛峰;徐飛;陳穎;李震中;張睿;張常印;蔣原;李懷林;陸承平;;2006-2008年華東地區(qū)空腸彎曲菌動(dòng)物源分離株分子分型研究[A];動(dòng)物檢疫學(xué)分會(huì)2010年學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2010年

4 劉光明;蔡慧農(nóng);曹敏杰;蘇文金;;一種檢測(cè)活的非可培養(yǎng)狀態(tài)空腸彎曲菌的新型方法[A];提高全民科學(xué)素質(zhì)、建設(shè)創(chuàng)新型國(guó)家——2006中國(guó)科協(xié)年會(huì)論文集[C];2006年

5 黃金林;許海燕;鄭國(guó)軍;劉佩紅;蘇潔;姜峰;潘志明;張弓;劉秀梵;焦新安;;部分省市雞群空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌流行狀況分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)畜牧獸醫(yī)生物技術(shù)學(xué)分會(huì)暨中國(guó)免疫學(xué)會(huì)獸醫(yī)免疫分會(huì)第七次研討會(huì)論文集[C];2008年

6 李震中;劉慧;劉向東;朱一飛;張軍峰;李春巖;;致GBS空腸彎曲菌的w/a基因簇序列對(duì)比研究[A];中國(guó)遺傳學(xué)會(huì)第八次代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

7 黃金林;許海燕;包廣宇;張弓;劉佩紅;姜峰;潘志明;劉秀梵;焦新安;;不同來(lái)源空腸彎曲菌分子流行病學(xué)分析[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2009學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（上冊(cè)）[C];2009年

8 海泉;張煥容;楊發(fā)龍;岳華;;空腸彎曲桿菌耐藥機(jī)制研究進(jìn)展[A];中國(guó)畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)獸醫(yī)公共衛(wèi)生學(xué)分會(huì)成立大會(huì)暨第一次學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2008年

9 王維亞;;小鼠腸道M細(xì)胞的功能形態(tài)學(xué)研究[A];中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)第五次會(huì)議論文摘要匯編[C];1992年

中國(guó)重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 ;警惕十二種病原微生物[N];科技日?qǐng)?bào);2002年

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 束曉梅;空腸彎曲菌galE基因變異株的臨床意義研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2004年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

1 許紫建;豬、雞彎曲菌的分離鑒定和耐藥性分析及空腸彎曲菌LAMP檢測(cè)方法的研究[D];河北農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

2 李波;空腸彎曲菌peblA和cadF的克隆表達(dá)及多克隆抗體制備與純化[D];南昌大學(xué);2011年

3 陸磊;空腸彎曲菌cdtB和cdtC原核表達(dá)及其產(chǎn)物的單克隆抗體制備[D];揚(yáng)州大學(xué);2013年

4 朱利;空腸彎曲菌質(zhì)粒研究初探[D];甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué);2001年

5 高愛民;空腸彎曲菌鐵相關(guān)受體基因序列的分析研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2011年

6 周益裝;空腸彎曲菌cadF和omp50的克隆表達(dá)[D];中國(guó)疾病預(yù)防控制中心;2010年

7 蘇潔;彎曲菌地方分離株毒力相關(guān)基因分析及HT-29細(xì)胞感染模型的建立與應(yīng)用[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

8 李鑫;空腸彎曲菌galE及Cj1136、Cj1138、Cj1139基因序列對(duì)比研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

9 劉衛(wèi)衛(wèi);空腸彎曲菌cdtA、cdtB、cdtC基因構(gòu)建與表達(dá)[D];河北醫(yī)科大學(xué);2010年

10 許海燕;空腸彎曲菌流行病學(xué)調(diào)查與PCR-RFLP分子亞分型研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2007年

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本文編號(hào)：659582