本文關(guān)鍵詞：腮腺炎減毒活疫苗感染性滴度熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立及驗(yàn)證

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【摘要】：目的建立腮腺炎減毒活疫苗感染性滴度熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,并進(jìn)行驗(yàn)證。方法針對(duì)腮腺炎減毒活疫苗株S79血凝素(hemagglutinin,H)基因保守區(qū)域設(shè)計(jì)特異性引物和Taq Man熒光探針;以05008批腮腺炎減毒活疫苗S79株成品作為參考品,將參考品或供試品稀釋后,接種于長(zhǎng)成單層的Vero細(xì)胞中,采用低滲合并凍融法將細(xì)胞破碎,吸取上清,進(jìn)行熒光定量RT-PCR。優(yōu)化病毒感染時(shí)間,并對(duì)該方法的特異性、精密性及準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果病毒感染的最佳時(shí)間為18 h;建立的熒光定量RT-PCR法只對(duì)腮腺炎減毒活疫苗具有特異性擴(kuò)增,對(duì)滅活的腮腺炎減毒活疫苗、水痘病毒、狂犬病病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和Vero細(xì)胞均無(wú)擴(kuò)增曲線出現(xiàn);該方法檢測(cè)4個(gè)濃度(1、1:5、1:52、1:53)樣品6組數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)均5%,不同操作人員于不同日期檢測(cè)4個(gè)濃度(1、1:5、1:52、1:53)樣品的標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程R2均大于0.97,RSD均5%;該方法與細(xì)胞病變法測(cè)得的11批腮腺炎減毒活疫苗成品的病毒滴度值之差均≤0.2 Lg CCID50/ml,兩組數(shù)據(jù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論建立的熒光定量PCR法檢測(cè)腮腺炎減毒活疫苗感染性滴度特異性較強(qiáng),精密性和準(zhǔn)確性良好,且快速方便,可應(yīng)用于企業(yè)生產(chǎn)過(guò)程中的內(nèi)部質(zhì)控。
【作者單位】： 科興(大連)疫苗技術(shù)有限公司;
【關(guān)鍵詞】： 腮腺炎減毒活疫苗S株 熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng) 病毒感染性滴度
【分類(lèi)號(hào)】：R373.16;R392-33
【正文快照】： 流行性腮腺炎是由腮腺炎病毒(mumps virus,Mu V)引起的以腮腺腫大為特征的急性呼吸道傳染病,發(fā)病以兒童、青少年為主,多見(jiàn)于冬春季節(jié)。2013年,我國(guó)流行性腮腺炎的發(fā)病率為23/10萬(wàn)[1],處于丙類(lèi)傳染病中發(fā)病數(shù)的前三位。自20世紀(jì)60年代以來(lái),腮腺炎減毒活疫苗在世界范圍內(nèi)廣泛使

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【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：658564