本文關(guān)鍵詞：TMEM16A鈣激活氯離子通道在Fisher大鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的表達(dá)及其電生理特性研究

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【摘要】：目的:探討跨膜蛋白16A(TMEM16A)鈣激活氯離子通道在Fisher大鼠甲狀腺濾泡上皮(FRT)細(xì)胞的表達(dá)及其電生理特性。方法:構(gòu)建pUB6/V5-TMEM16A真核表達(dá)載體。脂質(zhì)體方法轉(zhuǎn)染TMEM16A至FRT細(xì)胞,同時(shí)優(yōu)化脂質(zhì)體和載體的量和比例,獲得最佳轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)效果,殺稻瘟菌素(blasticidin)進(jìn)行抗生素篩選,獲取穩(wěn)定表達(dá)TMEM16A的FRT細(xì)胞株。RT-PCR和免疫熒光檢測TMEM16A于FRT細(xì)胞的表達(dá)情況;倒置熒光顯微鏡下觀察TMEM16A在FRT細(xì)胞中的表達(dá)和定位;應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)和鹵族元素敏感的熒光蛋白YFPH148Q/I152L檢測TMEM16A鈣激活氯離子通道的功能。結(jié)果:BamHⅠ和XbaⅠ雙酶切的瓊脂糖凝膠電泳和測序結(jié)果表明目的基因TMEM16A成功克隆到真核表達(dá)載體pUB6/V5中;RT-PCR和免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明經(jīng)殺稻瘟菌素篩選后的FRT細(xì)胞在mRNA和蛋白水平表達(dá)TMEM16A,倒置顯微鏡下觀察結(jié)果表明TMEM16A在FRT細(xì)胞膜上有表達(dá);應(yīng)用全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)和鹵族元素敏感的熒光蛋白YFP-H148Q/I152L證實(shí)穩(wěn)定表達(dá)于FRT細(xì)胞的TMEM16A具有經(jīng)典的鈣激活氯離子通道特性。結(jié)論:FRT細(xì)胞可高效表達(dá)TMEM16A。TMEM16A是鈣激活氯離子通道的分子基礎(chǔ)。
【作者單位】： 吉林醫(yī)藥學(xué)院生物化學(xué)檢驗(yàn)教研室;吉林醫(yī)藥學(xué)院營養(yǎng)教研室;吉林醫(yī)藥學(xué)院病原教研室;
【關(guān)鍵詞】： 跨膜蛋白A 鈣激活氯離子通道 膜片鉗術(shù) Fisher大鼠甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81202031) 吉林省教育廳基金資助課題(No.2013-351;No.2009-510) 吉林省大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計(jì)劃856 吉林醫(yī)藥學(xué)院大學(xué)生科研基金資助課題(吉醫(yī)學(xué)科字[2012]第12號(hào))
【分類號(hào)】：R363
【正文快照】： 鈣激活氯離子通道(calcium-activated chloridechannels,CaCCs)是一類在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中廣泛表達(dá)的離子通道蛋白,因其通過胞漿中游離鈣離子而激活,并跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)體內(nèi)含量最豐富的陰離子氯離子而命名為鈣激活氯離子通道[1]。鈣激活氯離子通道廣泛地存在于各種興奮性和非興奮性細(xì)胞

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 馬迎春;鄭夢曉;黃林靜;王園園;應(yīng)磊;王萬鐵;;Kv1.5對大鼠低氧高二氧化碳性PASMCs增殖、凋亡的影響及與MAPK通路的關(guān)系[J];中國病理生理雜志;2014年09期

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【相似文獻(xiàn)】

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10 趙R，

本文編號(hào)：657479