本文關鍵詞：綠色熒光蛋白轉基因小鼠不同源性間充質干細胞原代培養(yǎng)及生物學特性比較

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【摘要】：目的:探討綠色熒光蛋白轉基因小鼠臍帶和骨髓源性間充質干細胞(MSCs)的體外分離培養(yǎng)方法、生物學特性、表面標志及多向分化潛能。方法:應用Ⅱ型膠原酶消化培養(yǎng)法分離臍帶MSCs及密度梯度離心法分離骨髓MSCs進行體外培養(yǎng)。在倒置顯微鏡下觀察2種細胞的生長特點,運用生長曲線和MTT法檢測其原代細胞增殖能力,臺盼藍法測定細胞傳代成活率,采用流式細胞術測定2種第3代(P3)細胞DNA周期及表面標志物的表達,并比較其向成脂細胞和成骨細胞的分化潛能。結果:酶消化法分離培養(yǎng)的臍帶MSCs 1 d后,細胞貼壁呈成纖維形,2 d后呈漩渦狀生長且增殖明顯,3 d后達80%融合即可傳代;應用密度梯度離心法分離骨髓MSCs,體外培養(yǎng)4 d后,細胞貼壁呈圓形、梭形和多角形生長,5 d后呈克隆樣生長且增殖明顯,7 d后達80%融合即可傳代。原代培養(yǎng)的臍帶MSCs生長曲線近似"S"形,骨髓MSCs生長曲線較平緩;MTT法顯示臍帶MSCs在3~5 d增殖較明顯,骨髓MSCs 7 d后細胞增殖較明顯。2種P3細胞傳代成活率均為96%以上,G0/G1期細胞均為85%以上,無明顯差異(P0.05);2種P3細胞CD44、CD90和CD105陽性率均為(60.7±2.3)%以上高表達,CD45、CD19、CD14和CD79a均為(25.6±4.8)%低表達,兩者無明顯差異(P0.05);2種MSCs在體外均具有向成骨細胞和成脂細胞分化的潛能,臍帶MSCs向成骨及成脂細胞分化率均為90%以上,與骨髓MSCs的分化潛能比較有顯著差異(P0.05)。結論:臍帶MSCs較骨髓MSCs具有較強的增殖能力及分化潛能。綠色熒光蛋白轉基因小鼠的臍帶MSCs可作為較好干細胞示蹤的細胞源。
【作者單位】： 首都醫(yī)科大學附屬北京安貞醫(yī)院 北京市心肺血管疾病研究所分子生物學研究室;
【關鍵詞】： 臍帶 骨髓 間充質干細胞 生物學特性 綠色熒光蛋白 轉基因小鼠
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81370228) 省部共建重點教育部心血管重塑相關疾病重點實驗室項目(No.110267) 北京市優(yōu)秀人才培養(yǎng)資助項目(No.2012D003034000009) 北京市自然科學基金資助項目(No.7072012)
【分類號】：R329
【正文快照】： 綠色熒光蛋白(green fluorescent protein,GFP)轉基因小鼠是將來源于維多利亞多管水母(Aequoreavictoria)的發(fā)光蛋白通過轉基因技術敲入C57小鼠基因序列中獲得的組織細胞發(fā)出綠色熒光的小鼠,其細胞自發(fā)熒光的特點為干細胞示蹤提供了良好的動物來源[1-2]。目前對GFP轉基因小鼠

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本文編號：656434