本文關鍵詞：十二指腸鉤蟲ASP-2基因密碼子優(yōu)化及在大腸桿菌中高效表達

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【摘要】：目的:獲得十二指腸鉤蟲(Ancylostoma duodenale)分泌蛋白2(mAd-ASP-2)編碼基因,構建其高效表達的大腸桿菌表達體系。方法:以RT-PCR的方法得到克隆了編碼mAd-ASP-2的成熟肽全基因序列,克隆入原核表達載體pET-22b(+)中,組裝成表達載體pET-22b-mAd-ASP-2。利用大腸桿菌偏愛密碼子和GenScript rare codon analysis軟件獲得優(yōu)化密碼子優(yōu)化的mAdASP-2*基因序列并人工合成該基因,將其克隆入原核表達載體pET-22b(+),組裝成表達載體pET-22b-mAd-ASP-2*。將這2個表達載體分別轉化入大腸桿菌表達菌株Rosetta-gami-2(DE3)中,經IPTG誘導表達。結果:同樣條件下,密碼子優(yōu)化的mAd-ASP-2*基因比優(yōu)化前能夠獲得較高的表達,且以可溶形式存在。利用His Trap HP親和柱獲得了純化的重組蛋白mAd-ASP-2*,確定了純化重組蛋白咪唑洗脫液最佳濃度為200 mmol/L。Western blot分析結果進一步顯示,該融合蛋白可與鼠抗His-tag抗體發(fā)生特異性結合,說明表達蛋白為目的蛋白。結論:通過密碼子優(yōu)化實現了十二指腸鉤蟲ASP-2的高效表達,為進一步研究Ad-ASP-2的功能和以其作為血清學診斷抗原或保護性疫苗奠定了基礎。
【作者單位】： 鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術學院;
【關鍵詞】： 十二指腸鉤蟲 ASP-成熟蛋白 密碼子優(yōu)化 原核表達
【基金】：鹽城市科技發(fā)展計劃(YK2008080)
【分類號】：R392;R383.13
【正文快照】： 鉤蟲是鉤口科線蟲的統(tǒng)稱,在寄生人體消化道的線蟲中,鉤蟲的危害性最嚴重,由于鉤蟲的寄生,可使人體長期慢性失血,臨床上以貧血、營養(yǎng)不良、[Acta Univ Med Nanjing,2014,34(05):627-633]胃腸功能失調為主要表現。寄生人體的鉤蟲,主要有十二指腸鉤蟲(Ancylostomaduodenale dubin

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本文編號：647107