本文關(guān)鍵詞：粉塵螨1類變應(yīng)原T和B細(xì)胞表位t合基因的構(gòu)建與表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建粉塵螨1類變應(yīng)原(Der f 1)的T和B細(xì)胞表位嵌合基因原核表達(dá)載體。方法將Der f 1包含的5個(gè)T細(xì)胞表位(T1~T5)和6個(gè)B細(xì)胞表位(B1~B6),以B1-T1-B2-T2-B3-T3-B4-T4-B5-T5-B6和B1-B2-B3-B4-B5-B6-T1-T2-T3-T4-T5連接方式直接合成表位嵌合基因,并分別命名為Der f 1A和Der f 1B。構(gòu)建原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B,雙酶切及測(cè)序驗(yàn)證的陽(yáng)性克隆轉(zhuǎn)化到E.coli BL21(DE3)后誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE分析表達(dá)產(chǎn)物后進(jìn)行純化,并進(jìn)行Western blotting鑒定。ELISA法檢測(cè)嵌合蛋白對(duì)粉塵螨過(guò)敏患者血清IgE抗體的結(jié)合力。結(jié)果雙酶切及測(cè)序結(jié)果表明,成功構(gòu)建了原核表達(dá)重組質(zhì)粒pET-28a(+)-Der f 1A和pET-28a(+)-Der f 1B;SDS-PAGE分析表明,Der f 1A和Der f 1B誘導(dǎo)并純化成功,Western blotting結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)純化了Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白。與Der f 1相比,Der f 1A和Der f 1B嵌合蛋白與粉塵螨過(guò)敏患者血清IgE抗體的結(jié)合能力顯著降低(P均0.05),但Der f 1A和Der f 1B間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。結(jié)論成功表達(dá)了Der f 1的T和B細(xì)胞表位嵌合蛋白,為粉塵螨過(guò)敏的特異性免疫治療奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 安徽理工大學(xué)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 粉塵螨 粉塵螨類變應(yīng)原 T細(xì)胞表位 B細(xì)胞表位 免疫印跡試驗(yàn)
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81270091、30872367) 安徽省自然科學(xué)基金(070413088)
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 過(guò)敏性哮喘(哮喘)是臨床常見(jiàn)病和多發(fā)病,全世界約有3億人患有哮喘,其發(fā)病率和患病率呈逐年上升趨勢(shì)[1-3]。塵螨是引起哮喘最主要的氣傳性變應(yīng)原之一[4-5],其中與人類變態(tài)反應(yīng)性疾病聯(lián)系最緊密的主要是粉塵螨和屋塵螨。已報(bào)道的塵螨變應(yīng)原已超過(guò)30種,其中最重要且研究較多的主，

本文編號(hào)：633165