本文關(guān)鍵詞：新型人工miRNA表達框架的構(gòu)建及其有效性驗證

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【摘要】：目的構(gòu)建針對EGFP基因的人工miRNA表達框架并驗證其有效性。方法用融合PCR技術(shù)在體外構(gòu)建針對EGFP基因的人工miRNA表達框架。經(jīng)測序比對后,以該表達框架與報告基因質(zhì)粒p EGFP-N2分別共轉(zhuǎn)染人肝癌細胞系Hep G2、人宮頸癌細胞系He La和人肺腺癌細胞系A(chǔ)549,48 h后用倒置熒光顯微鏡觀察增強型綠色熒光蛋白(EGFP)的表達情況并用流式細胞儀定量檢測其抑制效率。結(jié)果構(gòu)建的人工miRNA表達框架經(jīng)測序比對正確;共轉(zhuǎn)染該表達框架和報告基因質(zhì)粒p EGFP-N2后,倒置熒光顯微鏡觀察結(jié)果顯示,3種細胞中發(fā)出熒光的細胞數(shù)量減少,熒光強度明顯降低。流式細胞術(shù)檢測結(jié)果顯示,Hep G2細胞、He La細胞和A549細胞中共轉(zhuǎn)染組和單獨轉(zhuǎn)染組的細胞熒光表達率差異均有統(tǒng)計學意義(t分別為20.80、30.35和20.34,P均0.01)。結(jié)論成功構(gòu)建靶向EGFP的人工miRNA表達框架,且此表達框架能有效而特異地抑制EGFP蛋白在Hep G2細胞、He La細胞和肺癌A549細胞中的表達。
【作者單位】： 中南大學湘雅醫(yī)學院醫(yī)學檢驗系;
【關(guān)鍵詞】： 人工miRNA表達框架 EGFP基因 Hep G細胞 He La細胞 A細胞
【基金】：中南大學本科生自由探索計劃項目(2282014bks193)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 人工miRNA(artificial microRNA,amiRNA)技術(shù)以內(nèi)源miRNA前體(pre-miRNA)作為骨架,將pre-miRNA的正義鏈和反義鏈置換為設(shè)計好的序列后轉(zhuǎn)入動植物中,利用miRNA的內(nèi)源性作用機制來抑制特定的靶基因[1]。與小干擾RNA(siRNA)相比,amiRNA具有較高的生物安全性和較低的毒副作用[2-3]

【參考文獻】

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【共引文獻】

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1 劉婷;王靜;汪俊軍;;脂質(zhì)相關(guān)miRNA研究進展[J];臨床檢驗雜志;2014年07期

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3 李英;謝佩雯;黃海;張秀娟;胡偉;王學軍;王升啟;;基于miRNA-155結(jié)構(gòu)的人工miRNA表達載體的構(gòu)建與評價[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

4 李英;胡偉;崔修亮;王學軍;王升啟;;人工microRNA技術(shù)研究進展[J];生物技術(shù)通訊;2012年06期

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李力群;高建華;潘盛盛;倪彬婷;;人高活性血管基質(zhì)層細胞快速分離及熒光標記的實驗研究[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2012年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：623781