本文關(guān)鍵詞：Calcein-AM熒光掃描測(cè)定細(xì)胞毒方法的建立

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【摘要】：目的:建立和優(yōu)化基于鈣黃綠素-AM(Calcein-AM)熒光掃描的細(xì)胞毒測(cè)定方法。方法:首先使用Calcein-AM染色靶細(xì)胞,掃描檢測(cè)Calcein-AM熒光值,確定Calcein-AM最佳激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng);然后優(yōu)化Calcein-AM染色的濃度和時(shí)間;最后以效靶比為30∶1~1∶1,共孵育時(shí)間為4 h,熒光掃描測(cè)定靶細(xì)胞裂解的百分率。結(jié)果:熒光染料Calcein-AM能有效標(biāo)記靶細(xì)胞,最佳激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)為485 nm和515 nm;Calcein-AM對(duì)細(xì)胞毒性低,不影響細(xì)胞活性;4 h內(nèi)的自發(fā)釋放率低于15%;CIK(Cytokine induced killer)效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞共孵育4 h的細(xì)胞毒效應(yīng)隨效靶比增加而升高。結(jié)論:建立和優(yōu)化了Calcein-AM熒光染料標(biāo)記靶細(xì)胞檢測(cè)細(xì)胞毒效應(yīng)的方法,該方法可避免放射性試劑的應(yīng)用,對(duì)細(xì)胞毒性低,準(zhǔn)確性高。
【作者單位】： 廣東藥學(xué)院生命科學(xué)與生物制藥學(xué)院/廣東省生物技術(shù)候選藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： Calcein-AM 細(xì)胞毒 熒光釋放測(cè)定
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(31100664) 國(guó)家重大科技專項(xiàng)“重大新藥發(fā)展”(2009ZX09103-708)項(xiàng)目資助
【分類號(hào)】：R392
【正文快照】： 細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(Cytotoxic T lymphocyte,CTL)活性測(cè)定提供了一種了解機(jī)體細(xì)胞免疫功能和探索疾病機(jī)理的方法,而目前可以直觀反映CTL效應(yīng)的有51Cr釋放法[1]、MTT法[2,3]、乳酸脫氫酶(LDH)釋放法[4]以及流式測(cè)定方法等[5,6]。51Cr釋放法由于放射性的問題國(guó)內(nèi)已無操作的環(huán)境,MT

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張丹;南黎;任玲;張揚(yáng);薛楠;劉歡葉;;CCK-8法和MTT法評(píng)價(jià)醫(yī)用抗菌不銹鋼細(xì)胞毒性的比較研究[J];口腔醫(yī)學(xué);2012年01期

2 張蕾;李芳秋;張士新;黃海嶸;李德閔;;LDH釋放法檢測(cè)腫瘤患者PBMC和CIK細(xì)胞的細(xì)胞毒活性[J];現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

3 王曉祺,譚巖,段秀梅,劉玲麗,方艷秋,姜艷芳,許淑芬,劉力華;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞毒方法的建立[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2004年10期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 段秀梅;譚巖;宋燕;王曉祺;劉力華;方艷秋;許淑芬;;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CIK的免疫表型和體外殺傷活性[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年04期

2 馬林;張穎;張凱強(qiáng);顧何峰;劉璐;程睿波;張思宇;;不同濃度氟化物對(duì)體外培養(yǎng)成釉細(xì)胞活性的影響[J];口腔醫(yī)學(xué);2013年10期

3 石平;蔣均紅;;口腔材料細(xì)胞毒性評(píng)價(jià)方法的研究進(jìn)展[J];中國(guó)美容醫(yī)學(xué);2014年14期

4 張羽;林其德;;不明原因自然流產(chǎn)與蛻膜NK細(xì)胞表面活化性受體表達(dá)的相關(guān)性研究[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2006年04期

5 李濤;孫振武;李玉曉;秦廣雍;;CFSE標(biāo)記技術(shù)及其在細(xì)胞研究中的應(yīng)用進(jìn)展[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2007年02期

6 李磊;楊雨晗;王雙;王e，

本文編號(hào)：623690