本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細胞原代培養(yǎng)方法的改良

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【摘要】：目的:探討體外組織塊培養(yǎng)原代人臍帶間充質(zhì)干細胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的改良方法,并觀察其形態(tài),免疫表型,成脂成骨分化等生物學特性。方法:從健康足月兒獲得臍帶,將血管剝離后,余下的結(jié)締組織剪成小塊,分別用傳統(tǒng)植塊法和改良植塊法分離培養(yǎng)原代hUC-MSCs。MTT法檢測細胞增殖情況并繪制細胞生長曲線,流式細胞儀檢測細胞免疫表型,成脂成骨誘導(dǎo)分化檢測其分化潛能,化學染色鑒定誘導(dǎo)分化結(jié)果。結(jié)果:改良植塊法臍帶組織貼壁培養(yǎng)3~4 d即可從組織塊邊緣長出長梭形成纖維樣原代細胞,5~6 d后細胞可長滿80%,比傳統(tǒng)植塊法原代細胞培養(yǎng)周期縮短了一半以上時間,細胞傳代后流水狀或漩渦狀生長,MTT法顯示細胞增殖能力強,流式細胞儀檢測提示CD90,CD105,CD73,CD166,CD29,CD44均陽性表達,陽性率均在95%以上,CD45和HLA-DR均陰性表達,陽性率低于2%;誘導(dǎo)分化實驗及化學染色結(jié)果證實,該細胞具有成脂和成骨多向分化潛能。結(jié)論:應(yīng)用與酶消化法相結(jié)合的改良植塊法可以獲得hUC-MSCs,比傳統(tǒng)植塊法縮短了原代培養(yǎng)周期,提高了細胞培養(yǎng)效率,所獲得細胞貼壁生長,增殖能力強,表達間充質(zhì)干細胞相關(guān)免疫表型,具有多向分化潛能,可在科研和臨床應(yīng)用中作為種子細胞來源。
【作者單位】： 江蘇大學附屬醫(yī)院皮膚科;
【關(guān)鍵詞】： 臍帶間充質(zhì)干細胞 原代培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化
【基金】：國家自然科學基金資助項目(30972663)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)是中胚層來源的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細胞[1-2],可在體外培養(yǎng)擴增,并能在特定條件下分化為成骨細胞、脂肪細胞、軟骨細胞、神經(jīng)細胞等[3-4]。自從Friedenstein等[5]從骨髓中發(fā)現(xiàn)MSC以來,研究人員目前已從全身

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