本文關(guān)鍵詞：人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)方法的改良

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【摘要】：目的:探討體外組織塊培養(yǎng)原代人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(human umbilical cord-derived mesenchymal stem cells,hUC-MSCs)的改良方法,并觀察其形態(tài),免疫表型,成脂成骨分化等生物學(xué)特性。方法:從健康足月兒獲得臍帶,將血管剝離后,余下的結(jié)締組織剪成小塊,分別用傳統(tǒng)植塊法和改良植塊法分離培養(yǎng)原代hUC-MSCs。MTT法檢測細(xì)胞增殖情況并繪制細(xì)胞生長曲線,流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞免疫表型,成脂成骨誘導(dǎo)分化檢測其分化潛能,化學(xué)染色鑒定誘導(dǎo)分化結(jié)果。結(jié)果:改良植塊法臍帶組織貼壁培養(yǎng)3~4 d即可從組織塊邊緣長出長梭形成纖維樣原代細(xì)胞,5~6 d后細(xì)胞可長滿80%,比傳統(tǒng)植塊法原代細(xì)胞培養(yǎng)周期縮短了一半以上時(shí)間,細(xì)胞傳代后流水狀或漩渦狀生長,MTT法顯示細(xì)胞增殖能力強(qiáng),流式細(xì)胞儀檢測提示CD90,CD105,CD73,CD166,CD29,CD44均陽性表達(dá),陽性率均在95%以上,CD45和HLA-DR均陰性表達(dá),陽性率低于2%;誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)及化學(xué)染色結(jié)果證實(shí),該細(xì)胞具有成脂和成骨多向分化潛能。結(jié)論:應(yīng)用與酶消化法相結(jié)合的改良植塊法可以獲得hUC-MSCs,比傳統(tǒng)植塊法縮短了原代培養(yǎng)周期,提高了細(xì)胞培養(yǎng)效率,所獲得細(xì)胞貼壁生長,增殖能力強(qiáng),表達(dá)間充質(zhì)干細(xì)胞相關(guān)免疫表型,具有多向分化潛能,可在科研和臨床應(yīng)用中作為種子細(xì)胞來源。
【作者單位】： 江蘇大學(xué)附屬醫(yī)院皮膚科;
【關(guān)鍵詞】： 臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞 原代培養(yǎng) 誘導(dǎo)分化
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30972663)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSC)是中胚層來源的具有高度自我更新能力和多向分化潛能的多能干細(xì)胞[1-2],可在體外培養(yǎng)擴(kuò)增,并能在特定條件下分化為成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞等[3-4]。自從Friedenstein等[5]從骨髓中發(fā)現(xiàn)MSC以來,研究人員目前已從全身

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