本文關(guān)鍵詞：腸出血性大腸桿菌O157∶H7毒力蛋白NleB1的表達(dá)、純化及多克隆抗體的制備與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建腸出血性大腸桿菌(EHEC)O157∶H7毒力蛋白nleB1基因的原核表達(dá)載體,誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白,制備NleB1的抗血清。方法從EHEC O157∶H7 EDL933株的全基因組中PCR擴(kuò)增出編碼nleB1的990個(gè)堿基序列,構(gòu)建原核表達(dá)載體pET24a-nleB1,將構(gòu)建的重組表達(dá)載體的質(zhì)粒pET24a-nleB1轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細(xì)胞中,利用異丙硫半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)融合蛋白His-NleB1表達(dá),并利用鎳柱進(jìn)行親和層析純化和切膠純化,以純化后的融合蛋白His-NleB1為抗原免疫BALB/c小鼠,獲得抗血清。Western印跡和ELISA法鑒定獲得的抗血清。結(jié)果成功構(gòu)建了pET24a-nleB1原核表達(dá)載體,純化得到融合蛋白His-NleB1,進(jìn)而免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體,Western印跡和ELISA法證實(shí)多克隆抗體制備成功。結(jié)論成功獲得了EHEC O157∶H7的毒力蛋白NleB1的多克隆抗體,為研究EHEC O157∶H7毒力蛋白NleB1的功能奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;安徽大學(xué);
【關(guān)鍵詞】： 腸出血性大腸桿菌 NleB 原核表達(dá) 蛋白純化 多克隆抗體
【分類號(hào)】：R378.21
【正文快照】： 腸出血性大腸桿菌(enterohemorrhagic Esche-richia coli,EHEC)O157∶H7是一種危害嚴(yán)重的腸道致病菌,該菌可使人患腹瀉、出血性結(jié)腸炎(hemor-rhagic colitis,HC)、溶血性尿毒綜合征(hemolyticuremic syndrome,HUS)及血栓形成性血小板減少性紫癜(thrombotic thrombocytopenic p

【共引文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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3 劉潔;夏興霞;王永山;張雪寒;費(fèi)榮梅;何孔旺;;大腸桿菌O157:H7抗體膠體金免疫層析檢測試紙條的研制[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)動(dòng)物傳染病學(xué)分會(huì)第四次豬病防控學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2010年

4 陳雅君;段志剛;魏戰(zhàn)勇;王亞賓;崔保安;張龍現(xiàn);陳麗穎;胡慧;;動(dòng)物源大腸桿菌O157

本文編號(hào)：615799