本文關(guān)鍵詞：人血清白蛋白特異性單域抗體的篩選鑒定、特性分析及應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 人血清白蛋白 噬菌體展示技術(shù) 單域抗體 白蛋白檢測(cè) 親和去除法

【摘要】：人血清白蛋白是存在于人體內(nèi)的一種重要而常見(jiàn)的蛋白質(zhì),是疾病檢測(cè)與診斷的重要標(biāo)記物之一。同時(shí),關(guān)于如何去除血清中高豐度白蛋白以促進(jìn)血漿蛋白質(zhì)組學(xué)分析和生物標(biāo)記物的發(fā)現(xiàn),一直以來(lái)也備受人們的關(guān)注。因此,建立并發(fā)展一種有效而快速的白蛋白檢測(cè)方法,具有重要意義。同時(shí),關(guān)于如何建立有效去除血清高豐度蛋白質(zhì)(白蛋白)的方法的問(wèn)題也亟待解決,其對(duì)血清蛋白質(zhì)組學(xué)的深入研究至關(guān)重要。本研究旨在對(duì)駱駝免疫人血清白蛋白、建立免疫文庫(kù)的基礎(chǔ)上,借助課題組成熟的噬菌體展示平臺(tái)與技術(shù),篩選并經(jīng)PE-ELISA鑒定、測(cè)序、表達(dá)獲得人血清白蛋白特異的單域抗體；再對(duì)這些單域抗體進(jìn)行一系列特性分析并試圖建立一套白蛋白檢測(cè)的方法,同時(shí)試圖利用NHS-活化珠子與單域抗體結(jié)合組裝親和柱、建立一套親和去除的方法。經(jīng)過(guò)努力,最終我們成功獲得了一個(gè)高質(zhì)量的噬菌體展示白蛋白單域抗體文庫(kù),并獲得了四株特異針對(duì)人血清白蛋白的單域抗體。經(jīng)過(guò)一系列分析,這些單域抗體表現(xiàn)出純度好、產(chǎn)量高、特異性強(qiáng)、親和力高等良好的特性。對(duì)于白蛋白的檢測(cè),我們成功建立了基于鏈霉親和素-生物素固相反應(yīng)系統(tǒng)的定向雙單域抗體夾心檢測(cè)的方法,線性范圍10-1000 ng/mL、最低檢測(cè)限達(dá)到21.2 ng/mL,為建立科學(xué)完善的白蛋白檢測(cè)方法提供基礎(chǔ)。最后,我們成功建立了一套基于單域抗體的親和去除法,并成功地去除了血清中的高豐度蛋白(血清白蛋白),為血清蛋白質(zhì)組學(xué)以及血清中疾病標(biāo)志物的發(fā)現(xiàn)提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：人血清白蛋白 噬菌體展示技術(shù) 單域抗體 白蛋白檢測(cè) 親和去除法
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號(hào)】：R392
【目錄】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-10
• 緒言10-12
• 第一章 文獻(xiàn)綜述12-21
• 1.1 人血清白蛋白的研究進(jìn)展12-17
• 1.2 駝源單域抗體的研究進(jìn)展17-21
• 第二章 噬菌體展示人白蛋白單域抗體文庫(kù)的構(gòu)建21-36
• 前言21
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法21-31
• 2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-33
• 2.3 結(jié)果討論33-36
• 第三章 人白蛋白單域抗體的篩選、表達(dá)及鑒定36-52
• 前言36
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法36-46
• 3.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果46-50
• 3.3 結(jié)果討論50-52
• 第四章 定向雙抗夾心檢測(cè)方法的建立52-63
• 前言52
• 4.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法52-59
• 4.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果59-61
• 4.3 結(jié)果討論61-63
• 第五章 親和去除法的建立63-72
• 前言63
• 5.1 實(shí)驗(yàn)材料和方法63-67
• 5.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果67-70
• 5.3 結(jié)果討論70-72
• 第六章 結(jié)論72-74
• 6.1 結(jié)論72
• 6.2 展望72-74
• 致謝74-75
• 參考文獻(xiàn)75-80
• 作者簡(jiǎn)介80-81

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2 程巨龍,王祥斌,張眾,劉晶,姚新生,黃華梁;一種構(gòu)建改形單域抗體的方法(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2002年03期

3 ;[J];;年期

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5 李敏;人血清白蛋白特異性單域抗體的篩選鑒定、特性分析及應(yīng)用[D];東南大學(xué);2016年

6 余芳;RP215-VH單域抗體構(gòu)建表達(dá)及活性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2014年

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本文編號(hào)：614331