本文關(guān)鍵詞：帕金森氏病模型構(gòu)建方法的探討

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【摘要】：研究目的:為了更好地了解PD的病因、發(fā)病機(jī)制、發(fā)生發(fā)展過程中的分子機(jī)制及潛在的治療靶點,本實驗分別構(gòu)建了模擬突變型LRRK2遺傳因素、突變型VPS35-α-synuclein遺傳因素相互作用及突變型VPS35-LRRK2遺傳因素相互作用導(dǎo)致的PD果蠅模型,并進(jìn)行了用于構(gòu)建PD小鼠模型的相關(guān)病毒載體的篩選,以便構(gòu)建模擬PD相關(guān)遺傳因素導(dǎo)致的PD小鼠模型,進(jìn)行后續(xù)研究。方法:1.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4,Chat-GAL4,24B-GAL4果蠅品系,將UAS-LRRK2-WT,UAS-LRRK2-G2019S和UAS-LRRK2-R1441C表達(dá)在所有神經(jīng)元,多巴胺能神經(jīng)元,膽堿能神經(jīng)元和肌肉組織中,構(gòu)建模擬突變型LRRK2遺傳因素導(dǎo)致的PD果蠅模型。2.將VPS35基因構(gòu)建到pUAST表達(dá)載體中,利用顯微注射技術(shù)將構(gòu)建好的重組分子注射入w1118果蠅卵,并利用mini-white標(biāo)記基因篩選,得到UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N轉(zhuǎn)基因果蠅品系。3.利用Elav-GAL4,Ddc-GAL4果蠅品系,將UAS-VPS35-WT,UAS-VPS35-D260N,UAS-VPS35-RNAi表達(dá)在所有神經(jīng)元和多巴胺能神經(jīng)元中,將所獲得的Elav-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi),Ddc-GAL4;UAS-VPS35-WT(D260N/RNAi)果蠅品系分別與UAS-α-synuclein-A53T,UAS-LRRK2-G2019S果蠅品系雜交,構(gòu)建模擬突變型VPS35-α-synuclein遺傳因素相互作用及突變型VPS35-LRRK2遺傳因素相互作用導(dǎo)致的PD果蠅模型。4.觀察果蠅的生命周期和運動能力的變化情況,應(yīng)用免疫熒光化學(xué)法和Western blot檢測TH的表達(dá)變化。5.通過腦立體定位技術(shù),向C57B小鼠分別注射6種病毒載體,以用于構(gòu)建PD小鼠模型的相關(guān)病毒載體的篩選。結(jié)果:1.Elav-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Elav-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S,Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-R1441C突變果蠅品系均出現(xiàn)生命周期縮短、運動能力(攀爬能力)減弱和多巴胺能神經(jīng)元的丟失。Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S果蠅品系較之更為突出的表現(xiàn)出這些癥狀。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突變果蠅品系均出現(xiàn)生命周期縮短、運動能力(攀爬能力)減弱和多巴胺能神經(jīng)元的丟失。3.rAAV1-EGFP病毒載體在術(shù)后3 w C57B小鼠的紋狀體中表達(dá)少,黑質(zhì)中無表達(dá),術(shù)后4 w和5 w C57B小鼠的紋狀體和黑質(zhì)中均有表達(dá);HSV1/NX01-GFP病毒載體在術(shù)后3 w、4 w和5 w C57B小鼠的紋狀體和黑質(zhì)中均有表達(dá);HSV1/NX03-GFP病毒載體在術(shù)后3 w C57B小鼠的紋狀體和黑質(zhì)中無表達(dá),在術(shù)后4 w和5 w C57B小鼠的紋狀體和黑質(zhì)中表達(dá)少且零星分布。結(jié)論:1.Ddc-GAL4;UAS-LRRK2-G2019S突變果蠅品系可以作為轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型用于后續(xù)的研究。2.VPS35(D260N/RNAi)-α-synuclein(A53T),VPS35(D260N/RNAi)-LRRK2(G2019S)突變果蠅品系可以作為轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型用于后續(xù)的研究。3.HSV1/NX01-GFP病毒載體可以用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因PD小鼠模型,用于后續(xù)的研究。
【關(guān)鍵詞】：帕金森氏病 轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型 轉(zhuǎn)基因PD小鼠模型
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 前言10-13
• 第一部分LRRK2轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型的建立13-34
• 材料與方法13-19
• 1. 材料13-14
• 2. 方法14-19
• 結(jié)果19-31
• 討論31-33
• 結(jié)論33-34
• 第二部分VPS35-α-synuclein, VPS35-LRRK2轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型的建立34-81
• 第一節(jié)UAS-VPS35-WT, UAS-VPS35-D260N轉(zhuǎn)基因果蠅品系的構(gòu)建34-38
• 材料與方法34-38
• 第二節(jié)VPS35-α-synuclein, VPS35-LRRK2轉(zhuǎn)基因PD果蠅模型的建立38-51
• 材料與方法38-51
• 結(jié)果51-77
• 討論77-80
• 結(jié)論80-81
• 第三部分 構(gòu)建PD小鼠模型的相關(guān)病毒載體的篩選81-96
• 材料與方法81-85
• 1. 材料81-82
• 2. 方法82-85
• 結(jié)果85-93
• 討論93-96
• 結(jié)論96
• 參考文獻(xiàn)96-101
• 綜述 PD果蠅模型的研究現(xiàn)狀及進(jìn)展101-110
• 參考文獻(xiàn)107-110
• 縮略詞表（ABBREVIATION）110-111
• 攻讀學(xué)位期間本人出版或公開發(fā)表的論著、論文111-112
• 致謝112-113

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周明付，張華，吳金良，郭漳生，林玲，湯善鈞，，周祥庭;大鼠帕金森氏病模型的建立[J];河南醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;1994年04期

2 康復(fù)安,王忠誠,孫志強(qiáng),劉玉芝,裴進(jìn)京,何樂,王金明,羅世祺,郝建忠,王集生,甲戈,裴更,虞文煥,王稚輝;同種胚胎中腦腹側(cè)部植入猴帕金森氏病模型的實驗研究[J];中華神經(jīng)外科雜志;1991年03期

3 孫晉浩,楊琳,高英茂,李振華;6-羥基多巴不同部位毀損大鼠帕金森氏病模型的建立及比較[J];現(xiàn)代康復(fù);2001年23期

4 費力,江澄川,馮林音,季耀東;內(nèi)側(cè)前腦束毀損制作大鼠帕金森氏病模型[J];中華實驗外科雜志;2005年01期

5 陳繼貴;;腦移植免疫[J];日本醫(yī)學(xué)介紹;1992年03期

6 李鴻鈞,蘇婷,馬雁冰,和占龍,魯帥堯,戴長柏,孫茂盛;畢赤酵母表達(dá)的neurturin對恒河猴帕金森氏病模型中黑質(zhì)多巴胺能神經(jīng)元的保護(hù)作用[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;2004年08期

7 章為;TH和AADC基因在帕金森氏病模型大鼠紋狀體內(nèi)的共表達(dá)[J];四川解剖學(xué)雜志;2001年01期

8 陳學(xué)東,蔣立新,周長滿,劉大庸,鐘世鎮(zhèn);黑質(zhì)與紋狀體毀損所致大鼠帕金森氏病模型的行為學(xué)比較[J];神經(jīng)解剖學(xué)雜志;1999年03期

9 馬駿,田青,陳雄華,陳澤斌,王彥青,劉又香,孫國杰;針刺對帕金森氏病模型大鼠腦皮質(zhì)NOS含量的影響[J];湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年02期

10 ;[J];;年期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王文舉;Neurturin和TH雙順反子重組腺病毒的構(gòu)建及對恒河猴帕金森氏病模型的組合基因治療評價[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

2 孔祥臣;新型化合物FLZ對熱休克蛋白的誘導(dǎo)作用和對實驗性帕金森氏病模型多巴胺系統(tǒng)保護(hù)作用及機(jī)制的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

3 嚴(yán)敏;Lmx1α和NTN定向誘導(dǎo)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞為DA能神經(jīng)元及靶向性治療恒河猴PD模型的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉晴晴;帕金森氏病模型構(gòu)建方法的探討[D];蘇州大學(xué);2016年

本文編號：610107