本文關(guān)鍵詞：不同片段HIV-1膜蛋白三聚體的構(gòu)建、表達(dá)及其免疫原性

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【摘要】：目的構(gòu)建、表達(dá)不同片段1型人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus type 1,HIV-1)的膜蛋白三聚體,并檢測其免疫原性。方法以中國主要流行株HIV-1CRF_07 BC亞型基因為模板構(gòu)建pFUSE-gp160重組質(zhì)粒,以pFUSE-gp160為模板構(gòu)建pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF重組質(zhì)粒,將重組質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染293F細(xì)胞,轉(zhuǎn)染120 h后,收獲上清,經(jīng)Ni-NTA superflow、nProtein A SepharoseTM4 Fast Flow及Superose 12 Prep Grade分子篩純化后,分別進(jìn)行SDS-PAGE及Western blot鑒定。將各重組蛋白聯(lián)合MF59佐劑經(jīng)大腿肌肉注射免疫豚鼠,100μg/只,分別于第1、30及60天各免疫1次,初次免疫前7 d及末次免疫后第90天心臟采血,分離血清,ELISA法及假病毒系統(tǒng)分別檢測血清特異性抗體效價及中和抗體滴度。結(jié)果質(zhì)粒pFUSE-gp160、pFUSE-gp140FF、pFUSE-gp120FF、pFUSE-gp41FF、pFUSE-N55FF、pFUSE-N28FF經(jīng)測序鑒定構(gòu)建正確。各純化蛋白的SDS-PAGE及Western blot鑒定均可見目的條帶,gp120FF和gp140FF均可高通量表達(dá),其表達(dá)量分別為6和2.5 mg/L,gp41FF、N55FF和N28FF蛋白的表達(dá)量均低于0.5 mg/L,純化后的純度均較高。gp140FF組和gp120FF組豚鼠血清抗體效價分別為3.2×105和5.33×105、中和抗體滴度分別為405和462,均顯著高于其他組(P0.05)。結(jié)論 gp140FF和gp120FF能誘導(dǎo)豚鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的體液免疫反應(yīng)和中和抗體,本實驗為HIV-1疫苗的研發(fā)提供了參考。
【作者單位】： 中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心;
【關(guān)鍵詞】： 型人類免疫缺陷病毒 膜蛋白 三聚體 免疫原性
【基金】：國家十二五科技重大專項-艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治-DNA疫苗(2012ZX10001008-012) 傳染病預(yù)防控制國家重點實驗室留學(xué)歸國人員項目資助(2012SKLID402)
【分類號】：R392.1
【正文快照】： 1型人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiencyvirus type 1,HIV-1)是艾滋病(acquired immune de-ficiency syndrome,AIDS)的主要病原體,控制該病毒的傳播與發(fā)展已成為全球性難題。目前,對HIV-1的研究已有較大進(jìn)展,其傳播方式和發(fā)病機(jī)理的研究進(jìn)展使預(yù)防HIV-1感染有了更多的選

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本文編號：592062