發(fā)布時(shí)間：2017-07-27 14:19

  本文關(guān)鍵詞：小鼠微小RNA miR-21真核表達(dá)載體構(gòu)建及其在293細(xì)胞的活性表達(dá)

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【摘要】：目的構(gòu)建小鼠微小RNA miR-21的真核表達(dá)載體,在人胚腎293細(xì)胞中驗(yàn)證其活性表達(dá),為進(jìn)一步以此載體研究miR-21的功能打下基礎(chǔ)。方法根據(jù)小鼠miR-21的成熟序列及其上下游約170 bp的序列設(shè)計(jì)引物,利用PCR技術(shù)從小鼠基因組DNA擴(kuò)增含有miR-21前體的片段382 bp,克隆到質(zhì)粒pRc/CMV,對(duì)重組質(zhì)粒經(jīng)雙酶切及測(cè)序分析,鑒定完全正確后轉(zhuǎn)染人胚腎293細(xì)胞,G418(1 000 mg/L)篩選后獲得miR-21穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系,Northern blot驗(yàn)證其在293細(xì)胞的過表達(dá);同時(shí)構(gòu)建pmiR-21-Luc reporter熒光素酶報(bào)告質(zhì)粒,與miR-21重組質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞進(jìn)行熒光素酶活性分析,驗(yàn)證其調(diào)控活性。結(jié)果成功構(gòu)建小鼠miR-21的真核表達(dá)載體,其可以在293細(xì)胞中穩(wěn)定高效表達(dá),熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)其有生物活性。結(jié)論成功構(gòu)建小鼠miR-21的真核表達(dá)載體,為進(jìn)一步探討miR-21的生物學(xué)功能奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)院全軍復(fù)合傷研究所 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 重慶市納米醫(yī)藥工程技術(shù)研究中心;
【關(guān)鍵詞】： miRNAs miR- 真核表達(dá)載體 細(xì)胞
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30901558) 燒傷、創(chuàng)傷與復(fù)合傷國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室自主課題(SKLZZ201122)
【分類號(hào)】：R393
【正文快照】： 微小RNAs(microRNAs,miRNAs)是一類由基因組編碼的長(zhǎng)度約20 nt的高度保守的內(nèi)源性微小的非編碼單鏈RNA分子,通過與對(duì)應(yīng)的靶mRNA的3’非翻譯區(qū)(3’untranslated region,3’UTR)的非完全或完全配對(duì)結(jié)合,從而阻止其翻譯或破壞其穩(wěn)定性,實(shí)現(xiàn)對(duì)基因表達(dá)的調(diào)控[1]。越來(lái)越多的研究

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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中國(guó)重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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7 劉敏;miR-23a，，miR-24-2和miR-27a在炎癥反應(yīng)中的表達(dá)及其在LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞活化中的調(diào)節(jié)機(jī)制研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

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10 任凱夕;Notch信號(hào)通路調(diào)控巨噬細(xì)胞極化在腫瘤進(jìn)展中作用機(jī)制研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

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3 周軍;李建明;楊發(fā)達(dá);柳玉紅;丁彥青;;CDH22基因克隆及其真核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];中國(guó)熱帶醫(yī)學(xué);2008年07期

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3 郭鵬;閆承慧;郭亮;康建;韓雅玲;;小鼠E1A激活基因阻遏子RNA干擾表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)心血管病學(xué)分會(huì)第十次全國(guó)心血管病學(xué)術(shù)會(huì)議匯編[C];2008年

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10 查顯豐;楊力建;陳少華;閆小娟;李

本文編號(hào)：581844