本文關(guān)鍵詞：全骨髓貼壁法培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的改良研究

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【摘要】：本研究旨在利用紅細(xì)胞自然沉降性原理,以傳統(tǒng)的全骨髓貼壁法為基礎(chǔ),探討一種改良后簡便而高效的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)方法。采用6孔板培養(yǎng)細(xì)胞,將骨髓標(biāo)本用MSC完全培養(yǎng)液培養(yǎng)48 h,吸取上層無紅細(xì)胞的上清層,置于新的培養(yǎng)孔以分離獲取MSC。用倒置顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)及貼壁情況,記錄細(xì)胞首次貼壁時(shí)間、首次傳代時(shí)間,并以傳統(tǒng)全骨髓貼壁法為對(duì)照;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、細(xì)胞表面標(biāo)記;用油紅O及堿性磷酸酶試劑盒分別對(duì)MSC成脂、成骨能力進(jìn)行鑒定;應(yīng)用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法描繪第1代,第3代,第5代MSC增殖曲線。結(jié)果表明,用改良法培養(yǎng)的MSC高表達(dá)CD90、CD105、CD13、CD44,低表達(dá)CD14、CD45、CD34;細(xì)胞周期中G0/G1期88.76%,G2/M期3.04%,S期8.2%,符合干細(xì)胞周期特征;增殖曲線呈典型"S"型;油紅O與堿性磷酸酶染色均為陽性。同時(shí)與傳統(tǒng)方法相比,改良方法的細(xì)胞貼壁率顯著高于傳統(tǒng)方法(P=0.0004),首次貼壁時(shí)間短(P0.0001)、首次傳代時(shí)間短(P=0.001)。結(jié)論:骨髓標(biāo)本培養(yǎng)48 h后的上清層中含大量貼壁活性的懸浮MSC,改良方法是一種比傳統(tǒng)貼壁法更具有便捷、高效等優(yōu)點(diǎn)的培養(yǎng)方法。
【作者單位】： 華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院血液病學(xué)研究所;
【關(guān)鍵詞】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 全骨髓貼壁法 改良培養(yǎng)方法
【基金】：國家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(81170525)
【分類號(hào)】：R329.28
【正文快照】： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone marrow mesenchymalstem cells,BMMSC)是干細(xì)胞家族的重要成員,具有成脂、成骨等多向分化潛能及重要的免疫調(diào)節(jié)活性,廣泛應(yīng)用于組織修復(fù)、移植免疫調(diào)控等臨床領(lǐng)域。BMMSC還具有取材方便、體外傳代培養(yǎng)易擴(kuò)增、連續(xù)復(fù)制的干性、易于轉(zhuǎn)染外源性基因等特點(diǎn)

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本文編號(hào)：565960