本文關(guān)鍵詞：SDF-1α-GFP基因重組腺病毒載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞的條件優(yōu)化研究

  更多相關(guān)文章： 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子α基因 重組腺病毒 載體構(gòu)建 HC細(xì)胞

【摘要】：目的:構(gòu)建基質(zhì)細(xì)胞衍生因子1α-綠色熒光蛋白(SDF-1α-GFP)重組腺病毒載體并摸索其轉(zhuǎn)染大鼠心肌細(xì)胞系的最佳條件。方法:人工合成SDF-1α基因并插入線性化表達(dá)載體,轉(zhuǎn)化感受態(tài)E.coliDH5a細(xì)胞。篩選陽性菌落,采用DNA測序技術(shù)測定目的基因序列。用獲得的重組腺病毒(adenovirus,Ad)載體轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,采用qPCR技術(shù)測定SDF-1α的mRNA表達(dá)水平。用不同滴度感染復(fù)數(shù)Ad-SDF-1α-GFP轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞系,采用倒置相差顯微鏡及熒光顯微鏡分別在24和48h檢測細(xì)胞形態(tài)及GFP蛋白陽性的細(xì)胞比率。結(jié)果:DNA測序證實SDF-1α基因構(gòu)建成功。qPCR結(jié)果顯示,與陰性對照組相比,MOI 2000組的SDF-1α的表達(dá)水平增加了約10 000倍,MOI 8000組的SDF-1α表達(dá)水平增加了約210 000倍。轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞系的結(jié)果顯示,MOI值為2 000、3 000、4 000、5 000、6 000、7 000及8 000的SDF-1α-GFP轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞48h后,其轉(zhuǎn)染率分別為(45±5.04)%、(75±5.70)%、(80±5.67)%、(85±6.45)%、(90%±6.90)%、(90±5.22)%和(95±5.36)%,但是當(dāng)MOI值區(qū)間為5 000~8 000時,細(xì)胞形態(tài)上出現(xiàn)明顯損傷。結(jié)論:MOI值為4 000的Ad-SDF-1α-GFP轉(zhuǎn)染H9C2細(xì)胞系48h能達(dá)到最佳的轉(zhuǎn)染效率,并最小程度損傷細(xì)胞。
【作者單位】： 暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;
【關(guān)鍵詞】： 基質(zhì)細(xì)胞衍生因子α基因 重組腺病毒 載體構(gòu)建 HC細(xì)胞
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年項目資助(No:81100078) 教育部科學(xué)研究重點項目資助(NO:211207) 廣州珠江科技新星資助計劃項目(No:2012J2200063) 廣東省科技廳博士啟動項目資助(No:S2011040001392)
【分類號】：R363
【正文快照】： 由于心肌細(xì)胞在缺血壞死后自身難以修復(fù),干細(xì)胞治療已經(jīng)成為治療心血管疾病新的研究方向。研究表明,干細(xì)胞植入后不能順利到達(dá)心臟損傷區(qū)域而影響其治療效果。目前證實SDF-1α/CXCR4信號通路是增加干細(xì)胞“歸巢”于損傷心肌的關(guān)鍵。如果在目標(biāo)區(qū)域內(nèi)高表達(dá)基質(zhì)細(xì)胞衍生因子(st

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本文編號：552969