本文關(guān)鍵詞：IL-17F對(duì)大鼠成骨細(xì)胞BMP-2及Noggin mRNA表達(dá)的影響

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【摘要】：目的骨細(xì)胞和免疫細(xì)胞共同起源于骨髓細(xì)胞,它們?cè)诠δ苌弦灿幸欢ǖ南噙B,并且受一些相同細(xì)胞因子的影響。最近有研究顯示IL-17因子家族中的一個(gè)重要成員IL-17F在體內(nèi)具有促進(jìn)成骨細(xì)胞的作用,但是相關(guān)研究甚少。本研究通過(guò)提取并培養(yǎng)大鼠原代成骨細(xì)胞,以不同濃度的IL-17F刺激成骨細(xì)胞,觀察IL-17F對(duì)成骨細(xì)胞的增殖能力、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2 (Bone Morphogenetic Protein 2, BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin mRNA表達(dá)的影響。方法1.大鼠原代成骨細(xì)胞的提取、培養(yǎng)及鑒定新生24h內(nèi)的Wistar大鼠8只,脫頸處死后,于無(wú)菌操作下取出顱骨,完全去除骨膜、血管及結(jié)締組織,反復(fù)沖洗骨片至透亮,將骨片剪碎后,運(yùn)用胰酶-膠原酶消化法及組織塊法提取原代成骨細(xì)胞。將提取的原代成骨細(xì)胞加適量培養(yǎng)液于培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng),并在傳代時(shí)運(yùn)用差速貼壁法對(duì)成骨細(xì)胞進(jìn)行純化,取純化后的第4代成骨細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。采用形態(tài)學(xué)觀察及堿性磷酸酶(ALP)染色法對(duì)成骨細(xì)胞進(jìn)行鑒定。2.實(shí)驗(yàn)分組及IL-17F刺激將純化后的第4代大鼠成骨細(xì)胞隨機(jī)分為正常對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組。對(duì)照組使用正常培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)；實(shí)驗(yàn)組分別用正常培養(yǎng)液配制的含有不同濃度(lng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml) IL-17F的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),共5個(gè)實(shí)驗(yàn)組,分別于干預(yù)第1、3、5天后進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。3.指標(biāo)檢測(cè)(1)采用MTT法檢測(cè)成骨細(xì)胞增殖活性。(2)采用RT-PCR檢測(cè)成骨細(xì)胞BMP-2及Noggin mRNA的表達(dá)。結(jié)果1.大鼠原代成骨細(xì)胞培養(yǎng)與鑒定：培養(yǎng)的原代成骨細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)穩(wěn)定,細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)狀況均符合成骨細(xì)胞的特征。ALP染色結(jié)果顯示,大量陽(yáng)性細(xì)胞胞核及胞質(zhì)內(nèi)可見ALP染色成的灰黑色顆�；驂K狀深染沉淀,鑒定為成骨細(xì)胞。2.IL-17F對(duì)成骨細(xì)胞增殖的影響MTT結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,第1天時(shí)只有100ng/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率明顯升高(P0.05),10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml實(shí)驗(yàn)組雖然也有升高但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；第3天與第5天時(shí),10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率均顯著升高(P0.05)；1ng/ml實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞增殖率在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)變化均不明顯(P0.05)。3.IL-17F對(duì)成骨細(xì)胞BMP-2及Noggin mRNA表達(dá)的影響RT-PCR結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml實(shí)驗(yàn)組BMP-2 mRNA表達(dá)水平從第1天開始就明顯升高(P0.05),而lOng/ml實(shí)驗(yàn)組BMP-2 mRNA表達(dá)水平第3天開始才顯著升高(P0.05),1ng/ml實(shí)驗(yàn)組BMP-2 mRNA表達(dá)水平則在三個(gè)時(shí)間點(diǎn)均無(wú)明顯變化(P0.05)。與對(duì)照組相比,lOng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml實(shí)驗(yàn)組Noggin mRNA表達(dá)水平均從第1天開始就顯著降低(P0.05),1ng/ml實(shí)驗(yàn)組Noggin mRNA表達(dá)水平則始終無(wú)明顯變化(P0.05)。結(jié)論一定濃度的IL-17F可以促進(jìn)體外培養(yǎng)的大鼠成骨細(xì)胞增殖,提高大鼠成骨細(xì)胞BMP-2 mRNA表達(dá),降低Noggin mRNA表達(dá),并且呈一定的劑量-時(shí)間依賴性。
【關(guān)鍵詞】：IL-17F 成骨細(xì)胞 BMP-2 Noggin
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符號(hào)說(shuō)明11-12
• 前言12-15
• 材料和方法15-26
• 結(jié)果26-28
• 討論28-35
• 結(jié)論35-36
• 附表36-37
• 附圖37-39
• 參考文獻(xiàn)39-45
• 致謝45-46
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表文章及獲獎(jiǎng)項(xiàng)目46-47
• 附件47

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