本文關(guān)鍵詞：松果菊苷對MPTP亞急性帕金森病小鼠模型炎性損傷保護(hù)機(jī)制的研究

  更多相關(guān)文章： 帕金森病 MPTP 炎性反應(yīng) 膠質(zhì)細(xì)胞 松果菊苷 pro-BDNF ERK1/2

【摘要】：目的：應(yīng)用MPTP亞急性帕金森病小鼠模型,觀察松果菊苷對該模型中小鼠的DA能神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用。研究、探討松果菊苷對該模型所致炎性反應(yīng)的作用機(jī)制,并闡明松果菊苷發(fā)揮DA能神經(jīng)元保護(hù)作用可能的分子信號通路,為探索中醫(yī)藥治療PD的理論和實(shí)踐提供有益的思路和方法。方法：選用10周齡健康野生型,C57BL/6J雄性小鼠,給予松果菊苷(ECH 30 mg·kg-1,每天一次,實(shí)驗(yàn)的第1d至最后1d,持續(xù)16d)或等量的生理鹽水灌胃,1h后予MPTP (MPTP 30 mg-kg-1,每天一次,實(shí)驗(yàn)的第8d至第12d,持續(xù)5d)或等量的生理鹽水皮下注射,建且MPTP亞急性帕金森病小鼠模型。應(yīng)用自發(fā)活動、爬桿實(shí)驗(yàn)以及步態(tài)實(shí)驗(yàn)這三項(xiàng)行為學(xué)指標(biāo)觀察多巴胺(Dopamine, DA)運(yùn)動能神經(jīng)元的損傷。應(yīng)用酪氨酸羥化酶(tyro sine hydroxylase, TH)免疫組織化學(xué)染色結(jié)合體視學(xué)計數(shù)分析黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)和中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area, VTA) DA能神經(jīng)元的損傷,并通過膠質(zhì)細(xì)胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)染色檢測SNpc區(qū)和VTA區(qū)星形膠質(zhì)細(xì)胞的活化。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測血清中的炎性因子——腫瘤壞死因子α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1 beta, IL-1β)、干擾素-γ (Interferon-gama, IFN-y)的變化。蛋白免疫印跡(Western blotting)法檢測黑質(zhì)(substantia nigra, SN)區(qū)小膠質(zhì)細(xì)胞激活的標(biāo)志物——離子鈣接頭蛋白分子1 (Ionized calcium-binding adaptor, IB A 1),膠質(zhì)細(xì)胞激活相關(guān)的凋亡因子caspase-3的蛋白表達(dá)水平,抗凋亡因子ERK1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2)及ERK1/2磷酸化(phosphorylated signal-regulated kinase 1/2, p-ERK)水平,自噬溶酶體調(diào)節(jié)位點(diǎn)AKT(protein kinase B)、AKT磷酸化(phosphorylated protein kinase B, p-AKT)水平以及mTOR的磷酸化(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)水平,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain derived neurotrophic factor, BDNF)、BDNF前體蛋白(pro-BDNF)、膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)以及TNF-α的蛋白水平的表達(dá)。結(jié)果：松果菊苷能夠增加MPTP亞急性損傷小鼠的白發(fā)活動的總路程(P0.05),縮短爬桿總時間(P0.05),但步態(tài)分析的變化無統(tǒng)計學(xué)差異(P0.05)。松果菊苷顯著降低MPTP所致TH+神經(jīng)元數(shù)目的減少(P0.05),減少反應(yīng)性星形細(xì)胞的標(biāo)記物GFAP的產(chǎn)生(P0.05)。松果菊苷抑制中腦黑質(zhì)區(qū)IBA1 (P0.05)、凋亡蛋白caspase-3 (P0.05)及促炎因子TNF-α (P0.05)的表達(dá)。松果菊苷減少血清中TNF-α (P0.05)、IFN-γ (P0.05)和IL-1β (P0.05)的產(chǎn)生。松果菊苷下調(diào)pro-BDNF (P0.05)的表達(dá),并上調(diào)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF (P0.05)、GDNF (P0.05)以及抗凋亡因子p-ERK1/2/ERK1/2 (P0.05)的表達(dá)。松果菊苷表現(xiàn)出上調(diào)p-AKT/AKT (P0.05)、下調(diào)p-mTOR (P0.05)蛋白表達(dá)的趨勢。結(jié)論：1.松果菊苷具有改善MPTP亞急性損傷小鼠的行為學(xué)表現(xiàn)的作用。2.松果菊苷能夠?qū)PTP亞急性損傷小鼠的DA能神經(jīng)元發(fā)揮抗炎、抗凋亡的保護(hù)作用。3.松果菊苷通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細(xì)胞與星形膠質(zhì)細(xì)胞的功能,抑制了炎性反應(yīng),增強(qiáng)了DA能神經(jīng)元的營養(yǎng)支持。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 MPTP 炎性反應(yīng) 膠質(zhì)細(xì)胞 松果菊苷 pro-BDNF ERK1/2
【學(xué)位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 緒論(前言)11-12
• 第一部分 理論研究12-15
• 一、帕金森病炎性反應(yīng)的細(xì)胞和分子學(xué)基礎(chǔ)12-13
• 1 PD炎性反應(yīng)與膠質(zhì)細(xì)胞的活化12
• 2 PD炎性反應(yīng)與ERK1/2/MAPK、PI3K/Akt/mTOR信號通路的相關(guān)研究12-13
• 二、中醫(yī)藥治療PD的現(xiàn)狀13
• 三、松果菊苷治療PD的理論基礎(chǔ)及研究進(jìn)展13-15
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究15-29
• 1 實(shí)驗(yàn)?zāi)康?/span>15
• 2 材料與方法15-19
• 2.1 實(shí)驗(yàn)動物15
• 2.2 主要試劑與儀器15-16
• 2.3 實(shí)驗(yàn)動物分組16
• 2.4 實(shí)驗(yàn)流程16
• 2.5 實(shí)驗(yàn)方法16-19
• 2.6 統(tǒng)計分析19
• 3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-28
• 3.1 行為學(xué)觀察結(jié)果19-20
• 3.2 給藥后小鼠中腦DA能神經(jīng)元損傷評價20-21
• 3.3 DA神經(jīng)元的凋亡21-22
• 3.4 小膠質(zhì)細(xì)胞的活化22
• 3.5 SN區(qū)炎性因子TNF-α的表達(dá)水平及血清中TNF-α、IFN-7及IL-1β的含量22-23
• 3.6 反應(yīng)性星形膠質(zhì)細(xì)胞的形態(tài)及數(shù)量23-24
• 3.7 SN區(qū)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、GDNF及pro-BDNF的表達(dá)24-26
• 3.8 SN區(qū)p-ERK1/2/ERK1/2的表達(dá)26-27
• 3.9 SN區(qū)p-Akt/Akt以及p-mTOR的表達(dá)27-28
• 4 結(jié)論28-29
• 討論29-32
• 附錄32-41
• 綜述32-38
• 英文縮略詞表38-39
• 主要溶液配制39-41
• 參考文獻(xiàn)41-48
• 攻讀碩士學(xué)位期間取得的學(xué)術(shù)成果48-49
• 致謝49

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本文編號：519855