本文關(guān)鍵詞：松果菊苷對MPTP亞急性帕金森病小鼠模型炎性損傷保護機制的研究

  更多相關(guān)文章： 帕金森病 MPTP 炎性反應 膠質(zhì)細胞 松果菊苷 pro-BDNF ERK1/2

【摘要】：目的：應用MPTP亞急性帕金森病小鼠模型,觀察松果菊苷對該模型中小鼠的DA能神經(jīng)元損傷的保護作用。研究、探討松果菊苷對該模型所致炎性反應的作用機制,并闡明松果菊苷發(fā)揮DA能神經(jīng)元保護作用可能的分子信號通路,為探索中醫(yī)藥治療PD的理論和實踐提供有益的思路和方法。方法：選用10周齡健康野生型,C57BL/6J雄性小鼠,給予松果菊苷(ECH 30 mg·kg-1,每天一次,實驗的第1d至最后1d,持續(xù)16d)或等量的生理鹽水灌胃,1h后予MPTP (MPTP 30 mg-kg-1,每天一次,實驗的第8d至第12d,持續(xù)5d)或等量的生理鹽水皮下注射,建且MPTP亞急性帕金森病小鼠模型。應用自發(fā)活動、爬桿實驗以及步態(tài)實驗這三項行為學指標觀察多巴胺(Dopamine, DA)運動能神經(jīng)元的損傷。應用酪氨酸羥化酶(tyro sine hydroxylase, TH)免疫組織化學染色結(jié)合體視學計數(shù)分析黑質(zhì)致密部(substantia nigra pars compacta, SNpc)和中腦腹側(cè)被蓋區(qū)(ventral tegmental area, VTA) DA能神經(jīng)元的損傷,并通過膠質(zhì)細胞原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein, GFAP)染色檢測SNpc區(qū)和VTA區(qū)星形膠質(zhì)細胞的活化。酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法檢測血清中的炎性因子——腫瘤壞死因子α (Tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白介素-1β(Interleukin-1 beta, IL-1β)、干擾素-γ (Interferon-gama, IFN-y)的變化。蛋白免疫印跡(Western blotting)法檢測黑質(zhì)(substantia nigra, SN)區(qū)小膠質(zhì)細胞激活的標志物——離子鈣接頭蛋白分子1 (Ionized calcium-binding adaptor, IB A 1),膠質(zhì)細胞激活相關(guān)的凋亡因子caspase-3的蛋白表達水平,抗凋亡因子ERK1/2 (extracellular signal-regulated kinase 1/2)及ERK1/2磷酸化(phosphorylated signal-regulated kinase 1/2, p-ERK)水平,自噬溶酶體調(diào)節(jié)位點AKT(protein kinase B)、AKT磷酸化(phosphorylated protein kinase B, p-AKT)水平以及mTOR的磷酸化(phosphorylated mammalian target of rapamycin, p-mTOR)水平,腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Brain derived neurotrophic factor, BDNF)、BDNF前體蛋白(pro-BDNF)、膠質(zhì)細胞源性神經(jīng)營養(yǎng)因子(Glial cell line-derived neurotrophic factor, GDNF)以及TNF-α的蛋白水平的表達。結(jié)果：松果菊苷能夠增加MPTP亞急性損傷小鼠的白發(fā)活動的總路程(P0.05),縮短爬桿總時間(P0.05),但步態(tài)分析的變化無統(tǒng)計學差異(P0.05)。松果菊苷顯著降低MPTP所致TH+神經(jīng)元數(shù)目的減少(P0.05),減少反應性星形細胞的標記物GFAP的產(chǎn)生(P0.05)。松果菊苷抑制中腦黑質(zhì)區(qū)IBA1 (P0.05)、凋亡蛋白caspase-3 (P0.05)及促炎因子TNF-α (P0.05)的表達。松果菊苷減少血清中TNF-α (P0.05)、IFN-γ (P0.05)和IL-1β (P0.05)的產(chǎn)生。松果菊苷下調(diào)pro-BDNF (P0.05)的表達,并上調(diào)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF (P0.05)、GDNF (P0.05)以及抗凋亡因子p-ERK1/2/ERK1/2 (P0.05)的表達。松果菊苷表現(xiàn)出上調(diào)p-AKT/AKT (P0.05)、下調(diào)p-mTOR (P0.05)蛋白表達的趨勢。結(jié)論：1.松果菊苷具有改善MPTP亞急性損傷小鼠的行為學表現(xiàn)的作用。2.松果菊苷能夠?qū)PTP亞急性損傷小鼠的DA能神經(jīng)元發(fā)揮抗炎、抗凋亡的保護作用。3.松果菊苷通過調(diào)節(jié)小膠質(zhì)細胞與星形膠質(zhì)細胞的功能,抑制了炎性反應,增強了DA能神經(jīng)元的營養(yǎng)支持。
【關(guān)鍵詞】：帕金森病 MPTP 炎性反應 膠質(zhì)細胞 松果菊苷 pro-BDNF ERK1/2
【學位授予單位】：南京中醫(yī)藥大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R285.5;R-332
【目錄】：

• 中文摘要7-9
• ABSTRACT9-11
• 緒論(前言)11-12
• 第一部分 理論研究12-15
• 一、帕金森病炎性反應的細胞和分子學基礎(chǔ)12-13
• 1 PD炎性反應與膠質(zhì)細胞的活化12
• 2 PD炎性反應與ERK1/2/MAPK、PI3K/Akt/mTOR信號通路的相關(guān)研究12-13
• 二、中醫(yī)藥治療PD的現(xiàn)狀13
• 三、松果菊苷治療PD的理論基礎(chǔ)及研究進展13-15
• 第二部分 實驗研究15-29
• 1 實驗目的15
• 2 材料與方法15-19
• 2.1 實驗動物15
• 2.2 主要試劑與儀器15-16
• 2.3 實驗動物分組16
• 2.4 實驗流程16
• 2.5 實驗方法16-19
• 2.6 統(tǒng)計分析19
• 3 實驗結(jié)果19-28
• 3.1 行為學觀察結(jié)果19-20
• 3.2 給藥后小鼠中腦DA能神經(jīng)元損傷評價20-21
• 3.3 DA神經(jīng)元的凋亡21-22
• 3.4 小膠質(zhì)細胞的活化22
• 3.5 SN區(qū)炎性因子TNF-α的表達水平及血清中TNF-α、IFN-7及IL-1β的含量22-23
• 3.6 反應性星形膠質(zhì)細胞的形態(tài)及數(shù)量23-24
• 3.7 SN區(qū)神經(jīng)營養(yǎng)因子BDNF、GDNF及pro-BDNF的表達24-26
• 3.8 SN區(qū)p-ERK1/2/ERK1/2的表達26-27
• 3.9 SN區(qū)p-Akt/Akt以及p-mTOR的表達27-28
• 4 結(jié)論28-29
• 討論29-32
• 附錄32-41
• 綜述32-38
• 英文縮略詞表38-39
• 主要溶液配制39-41
• 參考文獻41-48
• 攻讀碩士學位期間取得的學術(shù)成果48-49
• 致謝49

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本文編號：519855