本文關(guān)鍵詞：外源性ATP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的膜孔形成

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【摘要】：背景長期以來三磷酸腺苷(Adenosine triphosphate, ATP)一直被為是細(xì)胞能量供應(yīng)和利用的物質(zhì)形式。但近年來越來越多的實驗表明,胞外高濃度ATP是一種細(xì)胞死亡因子。最近的文獻(xiàn)指出膜的通透性隨著ATP濃度和作用時間的增加發(fā)生了質(zhì)的變化,低于900D的分子和離子均可通透,導(dǎo)致細(xì)胞水腫,空泡形成、凋亡和壞死。然而胞外高濃度ATP對PC12細(xì)胞的影響及其機(jī)制卻罕有研究報告。目的觀察外源性三磷酸腺苷(ATP)可否誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的PC12(pheochromocytoma cell lirie,PC12)細(xì)胞的膜孔形成,明確可能的關(guān)鍵分子靶標(biāo)。方法PC12細(xì)胞經(jīng)神經(jīng)生長因子(nerve growth factor,NGF)誘導(dǎo)分化成神經(jīng)元細(xì)胞。(1)取對數(shù)生長期狀態(tài)良好的細(xì)胞,隨機(jī)分為4組：即正常對照組(0mmol/L ATP組),1 mmol/L ATP組,3 mmol/L ATP組,5 mmol/L ATP組。不同濃度ATP作用后,倒置顯微鏡下觀察各組細(xì)胞形態(tài)變化、CCK-8檢測細(xì)胞存活率和酶標(biāo)儀檢測熒光攝取強度。Real-Time PCR和Western Blotting檢測P2X7受體和Panx 1 mRNA和蛋白表達(dá)。(2)將對數(shù)生長期的PC12細(xì)胞隨機(jī)分為7組：正常對照組、ATP損傷組、亮藍(lán)G (Brilliant Blue G,BBG,P2X7受體拮抗劑)組、BBG+ATP組、生胃酮(carbenoxolone,CBX,pannexin1拮抗劑)組,CBX+ATP組,BBG+CBX+ATP組。用CCK-8檢測細(xì)胞存活率和酶標(biāo)儀檢測熒光攝取強度。數(shù)據(jù)采用Prism統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析。結(jié)果1.ATP對PC12細(xì)胞形態(tài)和活力的影響ATP (1 mmol/L,3 mmol/L,5 mmol/L)作用3 h,可見隨著ATP濃度升高PC12細(xì)胞變圓、脫壁細(xì)胞增多；當(dāng)ATP濃度為3 mmol/L或5 mmol/L時,PC12細(xì)胞活力較對照組顯著下降(P0.05)。2.ATP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的膜孔形成不同濃度的ATP (0,1,3,5mmol/L)作用1 h,PC12細(xì)胞攝入YO-PRO-1的熒光強度隨著濃度增加而增加；同一濃度的ATP作用不同時間(15,30,60min),隨著時間的增加胞內(nèi)的熒光強度也增加。3.BBG和CBX對ATP誘導(dǎo)的細(xì)胞活力和膜孔形成的影響B(tài)BG預(yù)處理使ATP可明顯拮抗ATP引起的細(xì)胞活力下降和胞內(nèi)熒光強度增強(P0.05),而CBX預(yù)處理不改變ATP引起的細(xì)胞活力和胞內(nèi)熒光強度的變化(P0.05)。4.ATP對P2X7 R和Panx 1的mRNA和蛋白表達(dá)的影響ATP作用3 h,使PC12細(xì)胞P2X7受體的基因和蛋白表達(dá)明顯升高(P0.05),而Panx1的基因和蛋白變化無明顯變化(P0.05)。結(jié)論ATP誘導(dǎo)PC12細(xì)胞的膜孔形成有濃度和時間依賴性。ATP引起PC12細(xì)胞的膜孔形成可能主要與P2X7受體的表達(dá)和激活有關(guān)。
【關(guān)鍵詞】：PC12細(xì)胞 膜孔 嘌呤能P2X_7受體 三磷酸腺苷(ATP) 亮藍(lán)G
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：Q25
【目錄】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-12
• 材料和方法12-21
• 結(jié)果21-26
• 討論26-28
• 展望28
• 小結(jié)28-30
• 附圖30-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述：Pannexin 1通道蛋白對P2受體的激活作用35-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 附錄：中英文縮寫一覽表48-49
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表文章情況49-50
• 致謝50-51
• 個人簡歷51

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本文編號：511431