本文關(guān)鍵詞：登革病毒1型E蛋白第三結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)及其免疫原性，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的在大腸埃希菌中表達(dá)登革病毒(Dengue virus,DENV)1型(DENV-1)E蛋白第三結(jié)構(gòu)域(EⅢ),并分析重組蛋白的免疫原性。方法利用PCR技術(shù)從質(zhì)粒p MD-D1pr M/E中擴(kuò)增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表達(dá)載體p ET-32a(+),構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒p ET-D1EⅢ,轉(zhuǎn)化至E.coli Rosetta2(DE3)中,IPTG誘導(dǎo)表達(dá)。表達(dá)的重組蛋白經(jīng)親和層析和陰離子交換層析純化后,免疫家兔,制備多克隆抗體,采用Western blot法檢測(cè)抗體的特異性,間接ELISA法檢測(cè)抗體滴度,蝕斑減少中和試驗(yàn)(plaque reduction neutralization test,PRNT)檢測(cè)中和抗體效價(jià)。用純化的重組蛋白免疫經(jīng)腹部皮下多點(diǎn)注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1(Hawaii株)經(jīng)腦內(nèi)攻擊,分析重組蛋白對(duì)小鼠的免疫保護(hù)力。結(jié)果重組原核表達(dá)質(zhì)粒p ET-D1EⅢ經(jīng)雙酶切和測(cè)序證實(shí)構(gòu)建正確;表達(dá)的重組蛋白相對(duì)分子質(zhì)量約為33 000,主要以可溶性形式表達(dá),占重組菌裂解上清蛋白量的52.37%;純化的純度可達(dá)90%以上,濃度達(dá)2 mg/ml;制備的多克隆抗體特異性強(qiáng),效價(jià)高;重組蛋白能保護(hù)57.1%的小鼠免受致死劑量DENV的攻擊。結(jié)論成功在E.coli Rossetta2(DE3)中高效表達(dá)了DENV-1 EⅢ蛋白,純化的重組蛋白免疫家兔獲得的多克隆抗體具有較強(qiáng)的特異性和較高的效價(jià),且在小鼠免疫保護(hù)試驗(yàn)中顯示出較好的保護(hù)力。本實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的開發(fā)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 成都生物制品研究所有限責(zé)任公司;
【關(guān)鍵詞】： 登革病毒 E蛋白 第三結(jié)構(gòu)域 原核細(xì)胞 基因表達(dá) 免疫原性 免疫保護(hù)力
【基金】：國(guó)家高技術(shù)研究發(fā)展計(jì)劃(2012AA02A401)
【分類號(hào)】：R392-33
【正文快照】： 登革病毒(Dengue virus,DENV)是一種蚊媒傳播的病原體,屬于黃病毒科,黃病毒屬,分為4個(gè)典型的血清型(DENV-1、DENV-2、DENV-3、DENV-4)。DENV感染可引起人的登革熱(Dengue fever,DF)、登革出血熱(Dengue hemorrhagic fever,DHF)和登革休克綜合征(Dengue shock syndrome,DSS)。

【相似文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：登革病毒1型E蛋白第三結(jié)構(gòu)域的原核表達(dá)及其免疫原性，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：507895