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樹突狀細胞外泌體誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化

發(fā)布時間:2017-07-01 22:10

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【摘要】:本研究觀察人樹突狀細胞(dendritic cells,DC)來源的外泌體(DC-derived exosome,DCex)對人骨髓間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)成骨分化的影響。采用超速離心法從樹突狀細胞培養(yǎng)上清中獲取DCex,應(yīng)用電子顯微鏡觀察DCex形態(tài)并通過流式細胞術(shù)檢測和鑒定其細胞來源。取第3代MSC,設(shè)3組培養(yǎng)誘導(dǎo)體系:①對照組:α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液組;②實驗組:α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液+DCex(10μg/ml)組;③α-MEM基礎(chǔ)培養(yǎng)液+標準誘導(dǎo)劑組。采用熒光實時定量PCR、瓊脂糖凝膠電泳檢測各組成骨分化轉(zhuǎn)錄因子Runx2 mRNA的表達情況,并進行堿性磷酸酶(ALP)活性檢測。另外,熒光染料DiI標記DCex,應(yīng)用共聚焦顯微鏡觀察DCex進入MSC的過程。結(jié)果顯示,在電子顯微鏡下DCex呈典型的圓形或橢圓形膜層結(jié)構(gòu),直徑為40-100 nm,并表達DC細胞的標志物CD83,CD86,CD80和HLA-DR。在DCex處理MSC后6 h時,可在共聚焦顯微鏡下觀察到進入到MSC胞質(zhì)內(nèi)的DCex,隨著作用時間延長,細胞熒光強度增加。按組培養(yǎng)第7天,DCex實驗組Runx2表達較對照組增高,差異有統(tǒng)計學(xué)顯著性(P0.05);MSC培養(yǎng)第14天,DCex組ALP含量OD值與對應(yīng)蛋白比為2.22±0.27,顯著高于陰性對照組(1.20±0.21)(P0.01),但低于標準誘導(dǎo)組(3.22±0.24)(P0.05)。結(jié)論:DCex可以促進MSC向成骨細胞分化,其具體機制仍需進一步研究證實。
【作者單位】: 河北北方學(xué)院;空軍總醫(yī)院血液科;
【關(guān)鍵詞】樹突狀細胞 外泌體 間充質(zhì)干細胞 成骨分化
【分類號】:R329.28
【正文快照】: 目前,間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells,MSC)被認為是具有分化為成骨細胞、成軟骨細胞和成脂肪細胞潛能的成體干細胞。MSC的特殊性還在于其擁有的免疫調(diào)節(jié)能力。研究證實,MSC可以調(diào)節(jié)多種免疫細胞功能,涉及的對象包括T細胞、NK細胞、樹突狀細胞(dendritic cells,DC)等,其

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  本文關(guān)鍵詞:樹突狀細胞外泌體誘導(dǎo)間充質(zhì)干細胞向成骨細胞分化,由筆耕文化傳播整理發(fā)布。



本文編號:507670

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