本文關(guān)鍵詞：人外周血來源的過度生長內(nèi)皮細(xì)胞的分離、培養(yǎng)及鑒定，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：與內(nèi)皮干細(xì)胞相比,外周血來源的過度生長內(nèi)皮細(xì)胞(blood outgrowth endothelial cells,BOECs)富含血管新生和細(xì)胞黏附所需的蛋白,生物學(xué)特性更像內(nèi)皮細(xì)胞;同時它克服了成熟的人臍血內(nèi)皮細(xì)胞體外培養(yǎng)擴(kuò)增量少和表型易發(fā)生改變的缺點(diǎn),成為一種研究血管異常相關(guān)性疾病的新工具。本研究旨在建立從人外周血中體外培養(yǎng)、擴(kuò)增BOECs,并進(jìn)行鑒定的方法。采集外周血,梯度離心獲得單個核細(xì)胞,接種于膠原鋪板的細(xì)胞培養(yǎng)皿上,EGM-2培養(yǎng)4周。觀察BOECs的形態(tài)學(xué)特征,流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞表面抗原表達(dá)。血管性血友病因子(von Willebrand factor,v WF)多聚體分析BOECs上清v WF多聚體分布,熒光共聚焦顯微鏡鑒定細(xì)胞內(nèi)v WF的貯存及v WF的刺激分泌。結(jié)果表明,體外誘導(dǎo)培養(yǎng)4周左右,出現(xiàn)克隆性生長的細(xì)胞集落,BOECs呈現(xiàn)"鋪路石"樣外觀。經(jīng)過3周左右的擴(kuò)增后,過度生長的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)CD31、CD34、EPCR陽性,CD14、CD45、CD133陰性。收集BOECs上清,進(jìn)行v WF多聚體分析,與正常血漿相比v WF多聚體分布無差異。在熒光共聚焦顯微鏡下觀察,BOECs內(nèi)貯存v WF,加入佛波酯(phorbol-12-myristate-13-acetate,PMA)刺激后,細(xì)胞內(nèi)v WF增加,細(xì)胞表面可見v WF絲狀結(jié)構(gòu)。結(jié)論:本研究運(yùn)用該實(shí)驗(yàn)方法在國內(nèi)首次實(shí)現(xiàn)了人BOECs的體外培養(yǎng)、擴(kuò)增及鑒定。該方法可以為血管性血友病病人發(fā)病機(jī)制的探討提供天然的細(xì)胞模型,并可能為病人基因治療提供新工具。
【作者單位】： 蘇州大學(xué)附屬第一醫(yī)院、江蘇省血液研究所、衛(wèi)生部血栓與止血重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室、血液學(xué)協(xié)同創(chuàng)新中心;江蘇省蘇北人民醫(yī)院血液科;
【關(guān)鍵詞】： 外周血 過度生長內(nèi)皮細(xì)胞 細(xì)胞表型 血管性血友病因子
【基金】：2012年度江蘇省普通高校研究生科研創(chuàng)新計劃(832) 江蘇省科教興衛(wèi)工程-臨床醫(yī)學(xué)中心(ZX201102)資助
【分類號】：R329.2
【正文快照】： Isolation,Culture and Characte rization of Outgrowth Endothe lialCe lls from the Human Pe riphe ral BloodYIN Jie1,2▲,MA Zhen-Ni1▲,ZHAO Xiao-Juan1,RUAN Chang-Geng1*1Jiangsu Institute of Hematology,Key Laboratory of Thrombosis and Hemostasis of Ministry

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本文編號：497192